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目的与原理转化是指以质粒dna或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复...
体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒,选用转化和筛选技术,可获得含重组的阳性克隆.在此阳性克隆中,DNA可在生物体系中大量扩增,繁殖,保存以及表达目的基因的产物,这是PCR体外扩增DNA所...
外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个...
在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌...
一、原理回收目的片段的方法很多，常用的有冻融法，低熔点琼脂糖法，透析代法、电泳回收法、玻璃孔回收法等。本实验采用电泳回收法。通过特别的V形电泳槽，将挖出的含有目的片段的凝胶置于V形槽前，接通电泳电源，...
1998年，AndrewFire和CraigMello提出了一项新技术：通过dsRNA诱导特异基因的沉默，即所谓RNAi。2000年，AmyPasquinelli等将lin-4和let-7作小时序RN...
由于在一些生物中RNAi的影响格外显著，有人提出在RNAi途径中可能存在某个(信号)扩增的步骤。这种扩增可能是复制外源注入的dsRNA从而产生更多的sirna，也可能是直接扩增siRNA本身。这种扩增...
1868年，瑞士的内科医生FriedrichMiescher从外科医院包扎伤口的绷带上的脓细胞核中提取到一种富含磷元素的酸性化合物，将其称为核质(nuclein);后来他又从鲭鱼精中分离出类似的物质，...
1.外源基因在原核细胞中的表达蛋白质通常是研究的zui终目标，因此蛋白质的表达在基因工程中占有非常重要的地位。常用的表达系统有原核细胞和真核细胞。原核细胞表达系统主要使用大肠杆菌，真核细胞表达系统主要...
随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入，PCR已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即Taq酶）的合理选择是PCR成败与否的一个关键因素。目前市面上有多种Taq酶，能够满足多方面的实验需要。那么，...
ThisprotocolyieldsplasmidDNAthatissuitableforrestrictiondigestsａndcloningpurposes.Thispreparationmet...
碱裂解法提取质粒利用的是共价闭合环状质粒DNA与线状的染色体DNA片段在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线状的DNA双螺旋结构解开变性，在这样的条件下，共价闭...
随着对基因认识的不断深入，发现在同种生物的不同个体之间，尽管其蛋白质产物的结构和功能*相同或仅存在着细微的差异，但在DNA水平却存在着差异，尤其在不编码蛋白质的区域以及没有重要调节功能的区域表现更为突...
一．外源RNA诱导RNAi的应用1.基因功能研究从2001年《Nature》杂志上报道在哺乳动物培养细胞中通过siRNA成功诱导了特异性靶基因表达沉默后，RNA干扰技术就作为一项特异性基因沉默的有效工...
定量pcr实验简明操作2xtaqManUniversalPCRMasterMix20xTaqManGeneexpressionKits1.模板、引物及探针用量DNA用量：10~100ng每反应；cDN...
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