定量PCR技术简介2016/4/19

聚合酶链反应（polymerasechainreaction,PCR）是微量核酸扩增的有效工具，由于其灵敏、特异、快速等优点，在医学上已广泛应用与病毒、细菌病原体及遗传病、肿瘤的早期诊断。随着PCR技...

士锋从质粒抽提谈起2016/4/14

碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是...

DNA抽提指南（TRIZOL）2016/4/6

按照RNA分离操作方案在*移去水样层后，匀浆中的DNA存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA溶解在8mMNaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中*回收的DNA可以用...

转染常用的报告基因2016/3/30

报告基因(reportergene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控...

PCR扩增方面的技术解答2016/3/28

1、PCR括增的基本原理PCR(PolymeraseChainReaction)是体外复制DNA的技术，该技术几乎贯穿于现在分子生物学的各个领域。PCR体系由模板，特异性引物，高温聚合酶，脱氧核糖核酸...

RNA interference2016/3/21

OnewayofseeingwhataGENEdoesistoblockitsmessengerRNAａndnotetheeffects.Newworkshouldmaketheapproachmor...

How to isolate mRNA（分离mRNA）2016/3/16

Background:mRNAs(messengerRNAs)compriseonlyasmallpercentageofallRNAspeciesinaeukaryoticCell,inNeuros...

PROTOCOL FOR NORTHERN BLOTTING2016/3/2

Developedby:ChristopherToddHittingerModifiedfrom:"Bio-RadVacuumBlotterInstructionManual"ａnd"Analysis...

酶切扩增多态性序列2016/2/29

酶切扩增多态性序列（C1eavedAmplifiedPolymorphicSequences，CAPS）是一类以PCR为基础的共显性的分子标记，它的基本原理是先用已知位点的DNA序列去设计一套特异性的...

农杆菌质粒DNA提取常规方法2016/2/22

一、从在含20mg/lKanamycin和15mg/lGentamycin5-8ml的液体lb培养基中接种Agrobacterium细胞，然后在28℃、200-220rpm培养24h。然后进行质粒提取...

从农杆菌提取质粒向大肠杆菌DH10B电转化方法2016/1/25

①制做选择平板LB+25mg/lKan。②核对好要转化的质粒dna，在15mlFalcontube和cuvette（电转化用的石英样品槽，两面磨光，两面磨砂）标好质粒名称。将Falcontube、cu...

各家cDNA文库构建试剂盒优缺点比较2016/1/19

invitrogen的:采用的是Gateway技术：利用λ噬菌体位点特异重组系统的BP和LR双向反应，首先将PCR产物用传统方法克隆到Gateway化的入门载体，这个目标基因就可以迅速方便而且定向地重...

RNA 干扰（RNAi）实验技术相关探讨2016/1/12

摘要：RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA所引起的序列特异性基因沉默。它是真核生物中基因转录后沉默作用的重要机制之一。RNAi技术作为新兴的基因阻抑方法，在功能基因组学、微生物学、基因表达调控机理...

大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化2016/1/7

实验目的1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。3.学习将外源质粒DNA转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。实验原理转化(Transformatio...

DNA分子克隆2015/12/31

在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细...