RNA操作注意事项与实验技巧2015/8/31

由于rna酶的广泛存在与难以灭活的顽固特性。使得RNA的提取纯化和后续工作变得非常困难。为了保证RNA的研究工作成功，请仔细阅读下列注意事项，相信它能帮助您解决常见的问题。归根究底，RNA工作的主要问...

特殊组织DNA的提取及鉴定2015/8/28

1、提取DNA的简易方法:1)、从全血中提取DNA：取20μl抗凝血于0.5ml无菌管中，加500μl左右的ddH2O混匀后，12000rpm离心2分钟，弃上清，（若沉淀中仍有红细胞,需重复此操作1-...

RNA印迹杂交2015/8/20

Northern印迹的制备预备：1．按下述步骤，每泳道加10～20μg总RNA或0.5～1μgpoly(A)+RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。a.总RN...

士锋RNAi实验原理与方法2015/7/29

年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcri...

电泳操作要点及常见差错和失败原因分析2015/7/24

醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能*消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也...

含多个磷酸化位点的多肽的合成2015/7/15

生命活动与蛋白质的动态变化密切相关,很多情况下某些蛋白质是通过各种翻译后修饰来完成或改变其功能。在数量众多的蛋白质翻译后修饰中，蛋白质磷酸化修饰无疑是zui重要的一类，它是指通过蛋白激酶（Protei...

外源基因的诱导表达2015/7/10

1．目的了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lacI产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱...

士锋重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量2015/7/2

一、重组蛋白质的诱导表达1.挑取转化有质粒的单菌落，接种于3ml选择性LB液体培养基中，37℃，250rpm/min振摇培养过夜。2.次日将培养过夜的菌液500μl再接种于10ml（1:20）选择性L...

四种紫外吸收法测蛋白质含量2015/6/23

1.280nm的光吸收法因蛋白质分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm处具有zui大吸收，且各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是zui常用的紫外吸...

科学家可定位蛋白质2015/6/15

约翰斯霍普金斯大学的科学家们使用一种他们研发的方法，在将人体中一种细胞移动到位点时，能够不时的进行观察。这种方法可以了解一种蛋白质为何和如何在一个位置能进行信号传递和表达增加，而同样的蛋白质在另一地点...

免疫共沉淀技术在探索可能信号转导机制中的应用2015/6/11

在从事细胞信号转导的研究过程中我们常常需要探寻新的通路。在纵横交错，纷繁复杂的cross-talk中如何筛选可能的路径是signaltransduction领域永恒的话题，而免疫共沉淀技术则是常用而简...

醋酸纤维素薄膜电泳操作要点及常见差错和失败原因分析2015/6/9

醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能*消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也...

血浆游离血红蛋白测定2015/6/3

实验原理血红蛋白具有类过氧化物酶活性，可催化H2O2释放新生态氧，使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化，由无色zui终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较，可测出其含量。实验方法材料：1．2g/L邻甲联苯胺...

蛋白质的表达、分离和纯化2015/6/1

目的要求（1）了解克隆基因表达的方法和意义。（2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。实验原理克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的...

iTRAQ蛋白质定量与生物标志物发现技术平台2015/5/29

定量蛋白质组学是蛋白质研究的前沿学科。目前常用的定量蛋白质组学研究技术有荧光差异凝胶电泳（DIGE）、同位素亲和标记（ICAT）等。同位素标记相对和定量（iTRAQ）技术是近年来开发的一种新的蛋白质组...