大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化

实验目的
1.了解转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。
2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。
3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。

实验原理
转化( Transformation )是将异源 DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究的基本实验技术。
转化中的受体细胞： 转化过程所用的受体细胞一般是限制性修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，常用 RM 符号表示。
转化方法：电击法、 CaCl2、 RuCl等化学试剂法
感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态。
转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant )。

本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在含氨苄青霉素的平板培养基上培养，只有转化体才能存活，而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨苄青霉素的能力而死亡。
大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化