蛋白免疫印迹技术2015/5/21

免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（westernblot），它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。westernblot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上...

核酸凝胶电泳观察法2015/5/19

实验原理：琼脂糖是海藻中提取的线状高聚物，不同浓度的琼脂糖密度不同，一般PCR产物使用2%浓度，0.5Kb-10Kb的DNA使用1%浓度，基因组DNA使用0.3%-0.7%浓度；不同大小的核酸在同一浓...

离子交换柱纯化蛋白的问题2015/5/13

采用离子交换柱纯化蛋白时，洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定，可以根据什么来调整洗脱时的离子强度？离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的...

超滤实验基本步骤2015/4/24

1.配料；2.检查出口阀门是否关闭，搅拌料浆；3.启动泵，打开出口阀，开始超滤；4.改变压力，观察不同压力对超滤的影响；5.配制不同浓度的悬浮液进行超滤，观察悬浮液浓度对超滤的影响；6.关闭泵，结束实...

蛋白纯化经验指南2015/4/14

1）我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在...

Adeno-X 表达系统----Z有效的腺病毒系统之一2015/4/1

在人细胞中快速、高水平地表达目的蛋白在2至3个星期内即可获得价的病毒无需噬斑纯化靶细胞可以是分裂或不分裂的细胞（dividing/ornondividingcell）CLONTECH的Adeno-X?...

原核表达操作步骤及注意事项2015/3/27

克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不...

重组蛋白纯化的基本策略2015/3/25

三阶段纯化策略纯化问题所涉及的具体步骤zui终取决于样品的性质。但也有共同可参考的阶段捕获阶段：目标是澄清、浓缩和稳定目标蛋白。中度纯化阶段：目标是除去大多数大量杂质，如其它蛋白、核酸、内毒素和病毒等...

Pichia酵母表达系统使用心得2015/3/12

甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统zui为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能...

现代生物分离技术在多肽蛋白质分离纯化中的应用2015/3/10

一、前言随着基因工程和细胞工程的发展，尽管传统的分离方法（如溶剂萃取技术）已在抗生素等物质的生产中广泛应用，并显示出优良的分离性能，但它难以提取和分离蛋白质。其主要原因有两个：被分离对象——蛋白质等在...

动物淋巴管内皮细胞的分离2015/1/27

实验材料：1.哺乳动物胸导管淋巴管2.1×PBS，含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.43.0.2%Ⅰ型胶原酶4.眼科剪，眼科镊5.慕丝线（7号线）、细铁丝6.离心管（15ml、5...

支原体污染以及检测2015/1/21

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(zui小直径0.2um)并独立生活的微生物，约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性，可为圆形、丝状或梨形。支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电...

培养物的污染及防止2015/1/19

按现代的观念，凡是混入培养环境中对细胞生存产生有害的成分和造成细胞不纯的异物都应该视为污染。根据这一概念，组织培养污染物应包括生物（真菌、细菌、病毒和支原体）、化学物质（影响细胞生存、非细胞所需的化学...

Alarmablue法检测细胞活力2015/1/12

一、材料1.Resazurin细胞活力检测试剂盒（Biotium，Inc.30025）2.细胞：在本试验中，使用了三种人类前列腺癌细胞系进行检测。（1）DU145（ATCC，HTB-81）（2）PC3...

细胞计数实验2015/1/8

实验目的：掌握细胞计数的方法。了解区分细胞存活状态的方法。实验用品：0.4%台盼蓝溶液、无水乙醇或95%乙醇溶液、脱脂棉普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。实验原理：在细胞培养工作中，...