DNA抽提指南（TRIZOL）

按照RNA分离操作方案在*移去水样层后，匀浆中的DNA存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA溶解在8 mM NaOH中。用TRIZOL试剂从组织和培养细胞中*回收的DNA可以用来做样品中DNA含量的测定。同时抽提的基因组DNA可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为基因组DNA变异程度比总RNA或组织重量要小。[由于来源的不同，所得到的DNA沉淀在进一步应用前可能需要额外的纯化步骤（例如苯酚抽提等等）。]

实验所需但试剂未提供的物品：
* 酒精
* 0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）
* 75%酒精
8 mM NaOH
如无例外，以下操作均应在15—30℃下完成。

1.DNA的沉淀
移除中间层上残余的水样层，用酒精从中间层和苯酚层中沉淀DNA。按zui初匀浆化时每1 ml TRIZOL加0.3 ml的无水乙醇，反复颠倒来混合样品。然后将样品置于15—30℃下2—3分钟，再在2—8℃下以不超过2,000×g的离心力离心5分钟沉淀DNA。
小心移除水样层对抽提的DNA的质量至关重要。

2. DNA的洗脱
移除离心后苯酚层中的上清液，如有必要，可以将其保留用于抽提蛋白。用0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）洗涤DNA沉淀两次。按zui初匀浆化时每1 ml TRIZOL加1 ml柠檬酸钠溶液。每次洗涤时洗涤液要和DNA沉淀在15—30℃下作用30分钟（期间周期性混匀）再在2—8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。在两次洗涤完成后，用75%的酒精重悬DNA沉淀（每1 ml TRIZOL加1.5—2 ml75%酒精），在15—30℃下放置10—20分钟（期间周期性混匀）然后再在2—8℃下以2,000×g的离心力离心5分钟。
对于较大的DNA沉淀（> 200 μg）或样品中含有较多的非DNA物质需要用0.1 M柠檬酸钠（用10%酒精配制）溶液再洗涤一次。