【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
产品名称 | 人原位胰腺腺癌细胞;BxPC-3使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 人原位胰腺腺癌细胞;BxPC-3使用说明书
形态特性 上皮细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 这个细胞株不表达囊肿性纤维化跨膜电导调节子(CFTR)。 CFTR阳性的细胞株是Capan-1(ATCC HTB-79)。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清,10%
传代方法 消化5-10分钟。1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件 *培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR Amelogenin:X;CSF1PO:13;D13S317:11;D16S539:9,11;D18S51:12;D19S433:13,16.2;D21S11:29;D2S1338:17,19;D3S1358:14,16;D5S818:11;D7S820:10,13;D8S1179:13;FGA:20,21;TH01:9;TPOX:8;vWA:14,18
同工酶
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
Phospho-TAK1(Ser192) 英文名称: 磷酸化转化生长因子β活化激酶1 ?0.1ml
TSPYL5 英文名称: 特异Y蛋白样5抗体 ?0.2ml
Thrap3 英文名称: 甲状腺激素受体相关蛋白3抗体 ?0.1ml
TAS2R9 英文名称: 味觉受体蛋白家族2亚基9抗体 ?0.2ml
TPSB2 英文名称: 肥大细胞类*β2 ?0.1ml
phospho-TrkB (Tyr515) 英文名称: 磷酸化*激酶B抗体 ?0.1ml
TSLC1 英文名称: 细胞粘附分子1抗体 ?0.1ml
TMEM16A 英文名称: 跨膜蛋白16A/钙激活氯离子通道抗体 ?0.1ml硫酸葡聚糖 DEXTRAN SULFATE 超纯级
硫酸葡聚糖 DEXTRAN SULFATE 9042-14-2 50G 超纯级
DL-乳酸锂 DL-LACTIC ACID, LITHIUM SALT 高纯级
DL-乳酸锂 DL-LACTIC ACID LITHIUM SALT 16891-53-5 250G 高纯级
DL-乳酸锂 DL-LACTIC ACID LITHIUM SALT 16891-53-5 50G 高纯级
L-半*盐酸盐,一水 L-CYSTEINE HYDROCHLORIDE 7048-04-6 1KG 高纯级
L-半*盐酸盐,一水 L-CYSTEINE HYDROCHLORIDE 7048-04-6 250G 高纯级
L-半*盐酸盐,一水 L-CYSTEINE HYDROCHLORIDE 7048-04-6 500G 高纯级
L-半*盐酸盐,一水 L-CYSTEINE HYDROCHLORIDE MONOHYDRATE 5KG 高纯级
派洛宁Y PYRONIN Y 92-32-0 10G 超纯级
派洛宁Y PYRONIN Y 92-32-0 5G 超纯级
硝酸铁,九水 FERRIC NITRATE NONAHYDRATE 7782-61-8 1KG ACS级