产品名称 | 人结肠癌细胞;CaCo-2培养 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 人结肠癌细胞;CaCo-2培养
形态特性 上皮样细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞系分离自一个原发性直肠癌。 当细胞长满时,表现出典型的肠上皮细胞分化特征。表达维甲酸结合蛋白I和维甲酸结合蛋白II,角蛋白阳性。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 15%FBS
传代方法 1:2传代;3-4天一次
传代情况 PN3
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 荧光法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:11,14;D16S539:12;D18S51:12;D19S433:15;D21S11:30;D2S1338:17,25;D3S1358:17;D5S818:12,13;D7S820:11,12;D8S1179:12;FGA:19;TH01:6;THOX:9,11;vWA:16,18;D3S1358: 17; TH01: 6; D13S317: 11,14; D16S539: 12; D2S1338: 17, 25; D19S433: 15;
同工酶 无
染色体 88-98
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
CM-H124 人脑微血管内皮细胞*培养基 100mL
CM-R002 大鼠肺血管平滑肌细胞*培养基 100mL
CM-R003 大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞*培养基 100mL
CM-R004 大鼠气管上皮细胞*培养基 100mL
CM-R005 大鼠气管平滑肌细胞*培养基 100mL
CM-R006 大鼠肺成纤维细胞*培养基 100mL
CM-R007 大鼠支气管上皮细胞*培养基 100mL
CM-R008 大鼠支气管成纤维细胞*培养基 100mL
CM-R009 大鼠肺大静脉平滑肌细胞*培养基 100mL
CM-R010 大鼠肺大动脉平滑肌细胞*培养基 100mL
CM-R011 大鼠肺大动脉内皮细胞*培养基 100mL
CM-R012 大鼠肺动脉成纤维细胞*培养基 100mL
CM-R013 大鼠肺大静脉内皮细胞*培养基 100mL
CM-R014 大鼠气管和支气管上皮细胞*培养基 100mLCARD4 凋亡加强结构域蛋白4抗体
C4orf34 4号染色体开放阅读框34抗体
CKI gamma 3 酪蛋白激酶1γ3/CKI γ3抗体
CARD9 凋亡加强结构域蛋白9抗体
Cholesterol Oxidase *氧化酶抗体
Caspase 14 半胱胺酸蛋白酶蛋白14抗体
Caspase 5 半胱胺酸蛋白酶蛋白5抗体
CSFV 猪瘟病毒抗体
CSFV 猪瘟病毒抗体
Chromogranin C/Sg II 嗜铬粒蛋白C抗体
CHRNA10 烟碱型乙酰*受体α10/AChRα10抗体
CHRNA6 烟碱型乙酰*受体α6/AChRα6抗体
CHRNA9 烟碱型乙酰*受体α9/AChRα9抗体
CHRND 烟碱型乙酰*受体δ/AChRδ抗体
CARD8 凋亡加强结构域蛋白8抗体