人急性T淋巴细胞白血病细胞；JurkatE6-1培养

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  人急性T淋巴细胞白血病细胞；JurkatE6-1培养
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  悬浮生长
特征特性   该细胞是Jurkat-FHCRC细胞的克隆，是Jurkat细胞的衍生物。佛波酯或外源凝集素或T3单抗刺激后该细胞可产生大量的IL-2。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10% FBS
传代方法   保持细胞密度在1×105～1×106 cells/ml之间，不超过3×106 cells/ml。
传代情况  C15
冻存条件   基础培养基+8%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法（-）
STR   Amelogenin：X，Y；CSF1PO：11，12；D13S317：8，12；D16S539：11；D18S51：13，21；D19S433：14，15.2；D21S11：31.2，33.2；D2S1338：19，23；D3S1358：15；D5S818：9；D7S820：8，12；D8S1179：13，14；FGA：20，21；TH01：6，9.3；TPOX：8，10；vWA：18；
同工酶  
染色体   46,XY
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
人人抗乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗胰岛素受体抗体(AIRA)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗*(AT)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗眼肌抗体(EMAb)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗胸腺细胞球蛋白(ATG)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗信号识别颗粒抗体(SRP)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装
人抗心肌抗体(AMA)ELISA 试剂盒    96T/48T    试剂盒    组装/原装2-羟基嘧啶盐酸盐    CAS号：    38353-09-2    说明书
2-溴-4'-()苯乙酮    CAS号：    383-53-9    报价
二氟乙酯    CAS号：    383-62-0    进口、国产
2-硝基三氟甲苯    CAS号：    384-22-5    现货供应
1,2-二氢-2-异丁氧基喹啉-1-甲酸异丁酯    CAS号：    38428-14-7    说明书
3-甲氧基丙酸甲酯    CAS号：    3852/9/3    报价
2-巯基*    CAS号：    38521-46-9    进口、国产
4-甲基-5-羟甲基咪唑盐酸盐    CAS号：    38585-62-5    现货供应
5-羟甲基噻唑    CAS号：    38585-74-9    说明书
(二甲氨基)乙醛缩二甲醛    CAS号：    38711-20-5    报价