人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat, Clone E6-1使用说明书

细胞名称  人急性T淋巴细胞白血病细胞；Jurkat, Clone E6-1使用说明书
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  悬浮生长
特征特性   该细胞是Jurkat-FHCRC细胞株(Jurkat细胞株的衍生)的一个克隆。Jurkat细胞株来源于一个14岁男孩的外周血；经佛波酯和外源凝集素或抗T3单克隆抗体中的一种诱导后可产生大量IL-2(IL-2的产生需两种类型的诱导剂)；表达T细胞受体、CD3。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
传代方法   维持细胞浓度在1×105～1×106viable cells/ml；2～3天换液1次。
传代情况  C5
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法（-）
STR   Amelogenin：X，Y；CSF1PO：11，12；D13S317：8，12；D16S539：11；D18S51：13，21；D19S433：14，15.2；D21S11：31.2，33.2；D2S1338：19，23；D3S1358：15；D5S818：9；D7S820：8，12；D8S1179：13，14；FGA：20，21；TH01：6，9.3；TPOX：8，10；vWA：18；
同工酶  
染色体   42~46，XY
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
LAR    英文名称：    受体蛋白*磷酸酶F抗体    ?0.2ml
LIFR    英文名称：    白血病抑制因子受体抗体    ?0.1ml
lamin A + C    英文名称：    核纤层蛋白A抗体    ?0.1ml
Lamin B    英文名称：    核纤层蛋白B抗体(细胞核膜标志物)    ?0.1ml
lamin A + C    英文名称：    核纤层蛋白A/C抗体    ?0.2ml
LRIG2    英文名称：    LRIG2抗体    ?0.2ml
LEF-1    英文名称：    淋巴增强因子-1抗体    ?0.1ml
LRIG1    英文名称：    LRIG1抗体    ?0.2ml
LRIG3    英文名称：    LRIG3抗体    ?0.2ml
LI-cadherin    英文名称：    肝肠钙粘连蛋白抗体    ?0.1ml
Layilin    英文名称：    透明质酸受体抗体    ?0.1mlAnti-AP2 alpha/FITC  荧光素标记转录激活蛋白2α抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-alpha Adaptin/FITC  荧光素标记衔接蛋白1抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-Apaf-1 /FITC  荧光素标记凋亡蛋白活因子-1抗体（C端）IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-Apaf-1/FITC  荧光素标记凋亡蛋白活因子-1抗体（N端）IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-Protein C/FITC  荧光素标记APC活化蛋白C抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-Apelin/FITC  荧光素标记脂肪炎症因子Apelin抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-Apelin receptor/APJ receptor /FITC  荧光素标记Apelin receptor抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-APEX1/Ref-1 /FITC  荧光素标记氧化还原因子1抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-APG4B/AUTL1 /FITC  荧光素标记APG4B细胞自噬相关抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-API5/AAC11 /FITC  荧光素标记凋亡抑制因子5抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-APNG/MPG/FITC  荧光素标记N-甲基嘌呤DNA糖基化酶IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-apoA1/FITC  荧光素标记载脂蛋白A1抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-ApoB/FITC  荧光素标记载脂蛋白B抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml
Anti-apo-D /FITC  荧光素标记载脂蛋白D抗体IgG    Multi-class antibodies    规格：     0.2ml