【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
| 产品名称 | *耐药的胃肠道间质瘤细胞系；GIST-1114使用说明书 |
| 货期 | 3－5天 |
| 发货地 | 上海 |
细胞名称 *耐药的胃肠道间质瘤细胞系；GIST-1114使用说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞属保藏，其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代，3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 未定
复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
hospho-Cofilin (Ser3) 磷酸化丝切蛋白抗体
Cortactin 皮层肌动蛋白抗体
CRHR2 促肾上腺皮质释放激素受体2抗体
Phospho-c-Kit(Tyr703) 磷酸化原癌基因c-kit抗体
Phospho-c-Kit(Tyr721) 磷酸化原癌基因c-kit抗体
CRLF2 胸腺基质淋巴细胞生成素受体抗体
phospho-c-Abl (Tyr134) 磷酸化非受体*激酶c-Abl抗体
phospho-c-Abl (Tyr253) 磷酸化非受体*激酶c-Abl抗体
CPI17 alpha 蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗体
phospho-c-Abl(Tyr272) 磷酸化非受体*激酶c-Abl抗体
phospho-c-Abl(Tyr276) 磷酸化非受体*激酶c-Abl抗体A, 小鼠星形胶质细胞
rRTEC, 大鼠肾小管上皮细胞
rCSC, 大鼠心肌细胞
RDFs, 大鼠真皮成纤维细胞
RLFs, 大鼠肺成纤维细胞
rCF, 大鼠心脏成纤维细胞
MN-h, 小鼠海马神经元
MN-s, 小鼠纹状体神经元
mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞
MA, 小鼠星形胶质细胞
MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞
mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞
