人套细胞淋巴瘤细胞；JeKo-1使用说明书

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  人套细胞淋巴瘤细胞；JeKo-1使用说明书
形态特性   淋巴母细胞
生长特性  悬浮生长
特征特性   一位套细胞淋巴瘤患者的巨细胞变种显示白血病转变，从其外周血单核细胞出发建立了MCL细胞株JeKo-1。 JeKo-1细胞EB病毒阴性，并表达一种B细胞表型的IgM。 细胞过表达cyclin D1, Bcl-2, c-Myc 及 Rb 蛋白。 Bcl-1/J(H)基因重排得到了PCR证实。 JeKo-１细胞在SCID小鼠中高成瘤。 [PubMed: 9753063] 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  优质胎牛血清，20%
传代方法   1:2。3天内可长满。
传代情况  PN5
冻存条件   *培养基+8%DMSO
支原体检测  阴性
STR   Amelogenin:X；CSF1PO:9,12；D13S317:8,9；D16S539:12；D18S51:13,15；D19S433:13；D21S11:30,33.2；D2S1338:17,25；D3S1358:15,16；D5S818:10,13；D7S820:10,11；D8S1179:11,14；FGA:21,24；TH01:7；TPOX:8；vWA:14
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
七叶苷培养基    10(g)                
半固体动力培养基    250(g)                
牛津琼脂（OXA）基础    250(g)                
PALCAM培养基基础    250(g)                
Fraser肉汤基础    250(g)                
FB1/Half Fraser配套试剂(吖啶黄素、萘啶酮酸、柠檬酸铁铵、氯化锂)    4支/套×5(g)                
Fraser配套试剂(吖啶黄素、萘啶酮酸、柠檬酸铁铵、氯化锂)    4支/套×5(g)                
FB2配套试剂(吖啶黄素、萘啶酮酸、氯化锂)    3支/套×5(g)                
Fraser/Half Frase/FB1添加剂（A和B）    5mL×2/套×5(g)                
FB2添加剂    5mL/支×10(g)                
Fraser肉汤/FB2基础    250(g)                
Half Fraser肉汤/FB1基础    250(g)                
BLEB基础    250(g)                
UVM培养基    100(g)                
LPM琼脂基础    100(g)                hospho-ATF2 (Thr71 + Thr53)    磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-ATF2(Thr71)    磷酸化活化复制因子2抗体
ATF5    活化转录因子5抗体
ATF6 beta    活化转录因子6β抗体
ATIC    AICAR甲酰基转移酶抗体
phospho-ATM (Ser794)    磷酸化毛细血管扩张共济失调症突变蛋白抗体
ATP5E    ATP5E蛋白抗体
ATP5G2    ATP5G2蛋白抗体
ADAR1 (C-terminus)    双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体（C端）
AF10    髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗体
ADCY1    腺苷酸环化酶1抗体
APC    腺瘤样息肉抗体
AGPAT1    溶血磷脂酰基转移酶抗体
ANKS3    锚蛋白重复及SAM结构域蛋白3抗体
phospho-ALK (Tyr1586)    磷酸化间变型淋巴瘤激酶抗体
ACADVL    酰基*脱氢酶很长链抗体