小鼠角膜内皮细胞操作步骤

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

1.产品名称：小鼠角膜内皮细胞操作步骤

2.组织来源：眼角膜组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

小鼠角膜内皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，*部zui薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞(CEC)在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵”功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至*失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是*的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na+-K+-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na+梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态，维持透明性。

本公司的小鼠角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经NSE免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

M199、FBS、内皮细胞生长添加剂、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
表皮膜蛋白1抗原 
抗子宫内膜抗原 
内皮抑素/内皮他丁抗原 
E.coli O6大肠杆菌菌体蛋白 
普通大肠埃希菌菌体蛋白（非致病性） 
EphA1-R受体抗原 
红细胞生成素受体抗原 
磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗原 
丝裂原活化蛋白激酶抗原 
丝裂原活化蛋白激酶3抗原 
丝裂原活化蛋白激酶4抗原 
人磷酸化雌激素受体α多肽抗原 
磷酸化雌激素受体α抗原 
雌激素受体α抗原 
雌激素受体α抗原 
雌激素受体β抗原 
Ets转录因子家族ets1抗原 
肠道病毒71型/手足口病病毒抗原(C端) 
植物扩张蛋白ATEXPA10（拟南芥）抗原 
埃兹蛋白（多肽） 
鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白(N端多肽） 
鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白(C端多肽） 
脑型脂肪酸结合蛋白抗原 
Fas死亡结构域相关蛋白抗原 
粘着斑激酶抗原 
磷酸化粘着斑激酶抗原 
磷酸化粘着斑激酶抗原 
Fas活化的丝/*激酶抗原 
原纤维蛋白1抗原 
纤维母细胞生长因子4抗原 
纤维母细胞生长因子5抗原 
衰老关键蛋白抗原 
FosB抗原 
FOS样抗原2 
叉头蛋白F1抗原 
插头蛋白J1抗原 
FoxP1（T细胞转录因子）抗原 
插头蛋白M1抗原 
麻疹病毒抗原（麻疹病毒融合蛋白） 

CsA ELISA Kit  大鼠*A   48T
hs-CRP ELISA Kit  大鼠超敏C反应蛋白   48T
Beta2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit  大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M   48T
EMAb ELISA Kit  大鼠抗子宫内膜抗体   48T
LDL-IC ELISA Kit  大鼠低密度脂蛋白免疫复合物   48T
15-LO/LOX ELISA Kit  大鼠15脂加氧酶   48T
Tn- I ELISA Kit  大鼠肌钙蛋白Ⅰ   48T
SAA ELISA Kit  大鼠血清淀粉样蛋白A   48T
Hpt/HP ELISA Kit  大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白   48T
Alpha1-AGP ELISA Kit  大鼠α1酸性糖蛋白   48T
eNOS-3 ELISA Kit  大鼠内皮型一氧化氮合成酶3   48T
CETP ELISA Kit  大鼠*酯转移蛋白   48T
aGT ELISA Kit  大鼠血管紧张素原   48T
Hsp-60 ELISA Kit  大鼠热休克蛋白60   48T
MDA ELISA Kit  大鼠丙二醛   48T
SOD ELISA Kit  大鼠超氧化物歧化酶   48T
HSP gp96 ELISA Kit  大鼠热休克蛋白糖蛋白96   48T
CH50 ELISA Kit  大鼠血清总补体   48T
B7-2/sCD86 ELISA Kit  大鼠可溶性CD86   48T
HIF-1 Alpha ELISA Kit  大鼠低氧诱导因子1α   48T
Amylin ELISA Kit  大鼠胰淀素   48T
LTC4 ELISA Kit  大鼠白三烯C4   48T
Cyt-C ELISA Kit  大鼠*   48T
Ang- I ELISA Kit  大鼠血管紧张素Ⅰ   48T
MC Ab ELISA Kit  大鼠黑色素细胞抗体   48T