兔肌源性干细胞操作步骤

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

1.产品名称：兔肌源性干细胞操作步骤

2.组织来源：肌肉组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

兔肌源性干细胞分离自肌肉组织；肌源性干细胞（MDSCs）属于成体多能干细胞，具有多细胞系分化和自我更新能力。通过诱导刺激，MDSCs可以分化为脂肪、骨骼、软骨、平滑肌和神经细胞等多种细胞和组织类型；作为基因治疗和组织工程的供体细胞，已成为治疗心肌梗死、Duchenne氏肌营养不良等疾病的研究热点；近年来，肌源性干细胞在治疗尿失禁等方面的应用逐步得到重视。需注意的是，肌源性干细胞主要存在于骨骼肌组织中，只是成熟组织的很少部分细胞；平时处于静止状态，在细胞应激和组织缺失时才会激活；并且随着年龄的增加，所含细胞数量逐渐减少，而目前临床疾病的治疗主要是针对成体进行。肌源性干细胞的体外扩增对细胞移植和干细胞介导的基因治疗至关重要。对肌源性干细胞的扩增研究发现，EGF、FGF-2和SCF可以通过减数分裂或促使不分裂细胞进入有丝分裂周期，从而刺激细胞增生。更重要的是，细胞因子诱导的体外扩增可以通过自我更新不刺激细胞分化，从而保持干细胞表型。

本公司的兔肌源性干细胞采用胶原酶-*-*联合消化法结合密度梯度离心、差速贴壁法，zui后通过肌源性干细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经CD34、Desmin、CD45免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM[H]、FBS、HS、Chicken Embryo Extract(CEE)、Penicillin、Streptomycin等

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
(Cyclin Dependent Kinase 6)
Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgG CDK7/Cyclin H/MAT1
PE-Cy3标记的小鼠抗人IgG CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8)
PE-CY5标记的小鼠抗人IgG Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C)
APC标记的小鼠抗人IgG CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 )
Cy3标记的小鼠抗人IgG Cecropin
Cy5标记的小鼠抗人IgG HER2 receptor(erbB-2 isoform 2)
Cy5.5标记的小鼠抗人IgG C-erbB-4/HER4/erbB-4 (epidermal growth factor receptor4)
Cy7标记的小鼠抗人IgG CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)
罗丹明标记的小鼠抗人IgM CG6856-PA peptide
*标记的小鼠抗人IgM CGA(Chromogranin A)
辣根过氧化物酶标记的小鼠抗人IgM CGB(Chromogranin B)
FITC标记的小鼠抗人IgM ChRM1(muscarinic acetylcholine receptor)
Cy3标记的小鼠抗人IgM ChRM3 peptide
Cy5标记的小鼠抗人IgM CK18(Cytokeratin 18)
Cy5.5标记的小鼠抗人IgM CK18 peptide
PE-Cy3标记的小鼠抗人IgM CK18(Cytokeratin 18)
PE-CY5标记的小鼠抗人IgM CK14/17/42/10 peptide
APC标记的小鼠抗人IgM CK16(Cytokeratin 16)
Alexa Fluor 350标记的小鼠抗人IgM CK17(Cytokeratin 17)
Alexa Fluor 488标记的小鼠抗人IgM CK1/8/19 (Cytokeratin1/8/19; Keratin 1/8/19)peptide
Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgM CK2(casein kinase 2)
Alexa Fluor 647标记的小鼠抗人IgM CK5(Cytokeratin 5)
PE-Cy5.5标记的小鼠抗人IgM CK7(Cytokeratin 7)human
PE-Cy7标记的小鼠抗人IgM CK8(Cytokeratin 8)
碱性磷酸酶（AP）标记的小鼠抗人IgM CKIP-1(casein kinase 2 interaction protein 1)
胶体金标记的小鼠抗人IgM CLCA4(Calcium-activated chloride channel 4)
Cy7标记的小鼠抗人IgM C-Mer/MERTK (proto-oncogene tyrosine kinase)
PE标记的小鼠抗人IgM c-Myc tag
罗丹明标记的小鼠抗羊IgG AU5 tag
Human Collagenase Type II ELISA Kit  人胶原酶II   48T
Human Collagenase I ELISA Kit  人胶原酶I   48T
P-PKC(Human phospho Protein Kinase C) ELISA Kit  人磷酸化蛋白激酶C   48T
pERK(Human phospho-extracellular signal-regulated kinase) ELISA Kit  人磷酸化细胞外信号调节激酶   48T
AChE(Human Acetylcholinesterase) ELISA Kit  人乙酰*酯酶   48T
GOD(Human glucose oxidase) ELISA Kit  人葡萄糖氧化酶   48T
TH(Human tyrosine hydroxylase) ELISA Kit  人*羟化酶   48T
DDC(Human dopamine decarboxylase) ELISA Kit  人多巴胺脱羧酶   48T
NNE(Human non-neuronal enolase) ELISA Kit  人非神经元性烯醇化酶   48T
DBH(Human dopamine- Beta-hydroxylase) ELISA Kit  人多巴胺-β羟化酶   48T
CHAc(Human choline acetylase) ELISA Kit  人*乙酰化酶   48T
ICD(Human isocitrate dehydrogenase) ELISA Kit  人异柠檬酸脱氢酶   48T
Try- II (Human Trypsinogen-2) ELISA Kit  人*原Ⅱ   48T
ADA(Human adenosine deaminase) ELISA Kit  人腺苷脱氨酶   48T
HAase(Human Hyaluronidase) ELISA Kit  人透明质酸酶   48T
AST(Human Aspartate aminotransferase) ELISA Kit  人天*氨基转移酶   48T
ACP(Human Acid Phosphatase) ELISA Kit  人酸性磷酸酶   48T
GPI(Human glucose-6-phosphate isomerase) ELISA Kit  人葡萄糖6磷酸异构酶   48T
PGM(Human Phosphoglucomutase) ELISA Kit  人磷酸葡萄糖变位酶   48T