兔血管外膜成纤维细胞实验方法

1.产品名称：兔血管外膜成纤维细胞实验方法

2.组织来源：血管组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

兔血管外膜成纤维细胞分离自血管外膜组织；血管外膜是由疏松结缔组织组成，其中含螺旋状或纵向分布的弹性纤维和胶原纤维。血管壁的结缔组织细胞以成纤维细胞为主，当血管受损伤时，成纤维细胞具有修复外膜的能力。有的动脉中膜和外膜的交界处，有密集的弹性纤维组成的外弹性膜。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的血管外膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。血管外膜成纤维细胞是血管外膜的主要组成细胞之一，其主要生理功能合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

本公司的兔血管外膜成纤维细胞采用*-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM[H]、FBS、成纤维细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
Alexa Fluor 555标记的兔抗马IgM PI3K
罗丹明标记的兔抗马IgM BMP4(bone morphogenetic protein 4)
Cy3标记的兔抗马IgM PLGF (Placenta growth factor)
Cy5.5标记的兔抗马IgM PLGF (Placenta growth factor)
Cy5标记的兔抗马IgM PLGF (Placenta growth factor fragment)(human)
Cy7标记的兔抗马IgM PP-1
PE标记的兔抗马IgM BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)
FITC标记的兔抗马IgM PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor)
*标记的兔抗马IgM PP-2A (protein phosphatase 2A)
Cy5标记的羊抗牛IgG BOb-1(B-cell oct-binding protein 1)
*标记的羊抗牛IgG PP-2B alpha 1
FITC标记的羊抗牛IgG PR (Progestogerone receptor)
罗丹明标记的羊抗牛IgG PS-1(NT)，Presennillin-1(S182)
PE-Cy3标记的羊抗牛IgG PS-1，Presennillin-1(CT)
PE-CY5标记的羊抗牛IgG BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat)
APC标记的羊抗牛IgG BRCA1
Alexa Fluor 350标记的羊抗牛IgG PSD-95
Alexa Fluor 488标记的羊抗牛IgG BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)
Alexa Fluor 555标记的羊抗牛IgG PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor )
Alexa Fluor 647标记的羊抗牛IgG RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha)
PE-Cy5.5标记的羊抗牛IgG glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]
PE-Cy7标记的羊抗牛IgG SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide
Cy7标记的羊抗牛IgG SARS S-protein(抗原)
碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗牛IgG SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原)
胶体金标记的羊抗牛IgG BSEP peptide
 48T
ALP-B(Human Bone-specific Alkphase B) ELISA Kit  人骨特异性碱性磷酸酶B   48T
OT/BGP(Human Osteocalcin/Bone gla protein) ELISA kit  人骨钙素/骨*蛋白   48T
sRANKL(Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand) ELISA Kit  人可溶性核因子κB受体活化因子配基   48T
1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3(Human 1,25-dihydroxyvitamin D3) ELISA Kit  人1,25二羟基*3   48T
Human histon-H2b ELISA Kit  人组蛋白H2b   48T
OPG(Human Osteoprotegerin) ELISA KIT  人骨保护素   48T
BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit  人骨成型蛋白受体Ⅱ   48T
BMPR-1A(Human Bone morphogenetic protein receptor 1A) ELISA Kit  人骨成型蛋白受体1A   48T
BMP-4(Human Bone morphogenetic protein 4) ELISA Ki  人骨成型蛋白4   48T
BMP-2(Human Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit  人骨成型蛋白2   48T
cAMP(Human cyclic adenosine monophosphate) ELISA Kit  人*   48T
MASP(Human mannan binding lectin associated serine protease) ELISA Kit  人甘露聚糖结合凝集素相关*蛋白酶   48T
CDK-7(Human Cyclin-dependent kinase 7) ELISA Kit  人周期素依赖性激酶7   48T
CDK-2(Human Cyclin-dependent kinase 2) ELISA Kit  人周期素依赖性激酶2   48T
CDK-1(Human Cyclin-dependent kinase 1) ELISA Kit  人周期素依赖性激酶1   48T
AMPK(Human Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase) ELISA kit  人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶   48T
LDH(Human Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit  人