小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞实验方法

1.产品名称：小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞实验方法

2.组织来源：胎盘组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞分离自胎盘组织；胎盘（placenta）是哺乳动物期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官，由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿在子宫中发育，依靠胎盘从母体取得营养，而双方保持相当的独立性。胎盘还产生多种维持的激素，是一个重要的内分泌器官。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代，胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊、鳃丝等与母体组织紧密结合，以达到母子间物质的交换，这样的结构称假胎盘。绒毛膜是由滋养层和胚外中胚层的壁层构成。胚泡植入子宫内膜后，在胚泡表面形成许多绒毛样的突起，以细胞滋养层为中轴，外裹合体滋养层，称初级干绒毛。胚外中胚层长入初级干绒毛的中轴，使初级干绒毛变成了次级干绒毛。当绒毛膜的胚外中胚层内形成血管网和结缔组织，并与胚体内的血管相通时，次级干绒毛改称三级干绒毛。三级干绒毛末端的细胞滋养层细胞形成细胞滋养层壳。随着胚胎发育，丛密绒毛膜与基蜕膜共同构成了胎盘，而平滑绒毛膜则和包蜕膜一起逐渐与壁蜕膜融合。

本公司的小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞采用*-DNA酶联合消化法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Cytokeratin-7免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM-F12、FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
荧光素Cy3标记人IgM 
荧光素Cy3标记人IgA 
荧光素Cy3标记猴IgG 
荧光素Cy3标记猴IgM 
荧光素Cy3标记小鼠IgM 
荧光素Cy3标记猪IgG 
荧光素Cy3标记水貂IgG 
荧光素Cy3标记兔IgM 
荧光素Cy3标记大鼠IgM 
荧光素Cy3标记*-1受体拮抗剂 
荧光素Cy3标记血蓝蛋白 
荧光素Cy3标记鸡卵白蛋白 
荧光素Cy3标记* 
荧光素Cy3标记胰* 
Alexa Fluor 555标记羊IgG(细胞流式同型对照) 
Alexa Fluor 555标记大鼠IgG(细胞流式同型对照) 
荧光素PE-Cy7标记兔IgG(细胞流式同型对照) 
辣根过氧化物酶标记* 
(亲和纯化) 牛IgG 
荧光素标记牛血清白蛋白 
罗丹明标记牛血清白蛋白 
罗丹明标记狗IgM 
荧光素Cy3标记狗IgM 
荧光素PE标记狗IgG 
兔抗荧光素 
羊IgG 
辣根过氧化物酶标记羊抗人IgA 
荧光素APC标记羊IgG(细胞流式同型对照) 
罗丹明标记* 
(免疫亲和纯化)人IgM 
兔抗HRP 
(亲和纯化) 人IgG 
(亲和纯化) 人分泌型IgA 
*化人IgG 
荧光素Cy3标记猪胰岛素蛋白 
(免疫亲和纯化) 小鼠IgG 
小鼠IgM (免疫亲和纯化) 
(亲和纯化) 猴IgM 
Alexa Fluor 350标记小鼠IgG(细胞流式同型对照) 
Alexa Fluor 555标记小鼠IgG(细胞流式同型对照) 
 48T
RANTES/CCL5(Mouse regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted) ELISA Kit  小鼠正常T细胞表达和分泌因子   48T
MIP-2(Mouse Macrophage Inflammatory Protein 2) ELISA Kit  小鼠巨噬细胞炎性蛋白2   48T
OT(Mouse oxytocin) ELISA Kit  小鼠催产素   48T
MIP-3 Beta/ELC/CCL19(Mouse macrophage inflammatory protein 3 Beta) ELISA Kit  小鼠巨噬细胞炎性蛋白3β   48T
NTX(Mouse cross linked N-opeptide of type I collagen) ELISA Kit  小鼠Ⅰ型胶原N末端肽   48T
5-NT(Mouse 5-Nucleotidase) ELISA Kit  小鼠5核苷酸酶   48T
CD19(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD19分子   48T
CD3(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD3分子   48T
CD4(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD4分子   48T
CD8(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD8分子   48T
CD25(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD25分子   48T
CD20(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD20分子   48T
CD14(Rat Troponin T) ELISA Kit  小鼠CD14分子   48T
NGF(Mouse Nerve growth factor) ELISA kit  小鼠神经生长因子   48T
NT-3(Mouse Neurotrophin 3) ELISA kit  小鼠神经生长因子3   48T
NT-4(Mouse Neurotrophin 4) ELISA kit  小鼠神经生长因子4   48T
OPG(Mouse Osteoprotegerin) ELISA KIT  小鼠骨保护素   48T
BF(Mouse factor B) ELISA Kit  小鼠B因子