小鼠滑膜细胞操作步骤

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

1.产品名称：小鼠滑膜细胞操作步骤

2.组织来源：滑膜组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

小鼠滑膜细胞分离自滑膜组织；滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构，各种关节内疾病均会累及滑膜。而滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构，同时在各种关节疾患中也是主要病变部位。骨关节炎（OA）以关节软骨退行性变为特征，其病理改变累及关节的各个组成部分，但绝不仅局限于软骨，还包括软骨下骨、滑膜、半月板和韧带。各组成部分的病理改变相互影响，相互作用，共同加速关节的退变。滑膜细胞是构成滑膜层的zui大细胞群体，是维持关节正常功能的重要组织结构，它包埋在颗粒状无定性的基质中，基质内有分散的纤维分布。滑膜由A型（巨噬样滑膜细胞）、B型（成纤维样滑膜细胞）以及C型（树突细胞样滑膜细胞）细胞组成。滑膜细胞主要功能：①滑膜细胞产生润滑液成分，并且与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关；②滑膜细胞增生，表现为不依赖于支持物生长，并且分泌大量的效应分子来促进炎症和关节损坏；③是自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。

本公司的小鼠滑膜细胞采用混合酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM[H]、FBS、成纤维细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
大鼠孕激素/孕酮 
人钩端螺旋体IgM 
大鼠雌激素 
人钩端螺旋体IgG 
人阿米巴 
大鼠血管内皮细胞粘附分子 
大鼠白介素8 
人白喉抗体 
人囊虫病抗体 
大鼠脂联素 
人布鲁氏菌抗体IgG 
大鼠游离β绒毛膜* 
人水痘带状疱疹病毒IgM 
大鼠醛固酮 
大鼠* 
人水痘带状疱疹病毒IgG 
大鼠前列腺素F 
人军团菌抗体IgA 
大鼠前列腺素E1 
人军团菌抗体IgM 
人军团菌抗体IgG 
大鼠皮质酮/肾上腺酮 
人腮腺炎病毒IgM 
大鼠内皮素1 
人腮腺炎病毒IgG 
大鼠血管舒缓激肽 
人EB病毒IgM 
大鼠抵抗素 
人EB病毒IgA 
大鼠催乳素 
大鼠促生长激素释放激素 
人EB病毒IgG 
人利什曼原虫抗体 
大鼠促肾上腺皮质激素 
大鼠促卵泡素 
人登革热抗体 
人流感病毒抗体IgG 
大鼠雌二醇受体 
人腺病毒IgM 
大鼠前心钠肽 
大鼠大内皮素 
人腺病毒IgG 
人轮状病毒IgM 
大鼠迟现抗原 
大鼠降钙素 
人艾柯病毒IgM 
抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL12/MCP-5/FITC  荧光素标记单核细胞趋化蛋白5抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL13/MCP-4/FITC  荧光素标记单核细胞趋化蛋白4抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL14/HCC-1/FITC  荧光素标记嗜酸粒细胞趋化蛋白14抗体IgG   0.2ml
Anti-CYLD/cylindromatosis 1/FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠微管结合蛋白CYLD抗体IgG   0.2ml
Anti-phospho-CYLD(Ser418) /FITC  荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化微管结合蛋白CYLD抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL15/MIP5/FITC  荧光素标记巨噬细胞炎性蛋白15IgG   0.2ml
Anti-CCL16/HCC-4/FITC  荧光素标记巨噬细胞炎性蛋白16抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL17/TARC/FITC  荧光素标记胸腺活化调节趋化因子抗体IgG   0.2ml
Anti-ABCD1/MDC(small inducible cytokine A22 precursor)/FITC  荧光素标记抗嗜酸粒细胞趋化蛋白2抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL23/MPIF-1/FITC  荧光素标记骨髓抑制因子1抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL24/Eotaxin-2/FITC  荧光素标记嗜酸粒细胞趋化蛋白24抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL27/CTACK/FITC  荧光素标记皮肤T细胞虏获趋化因子抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL26/FITC  荧光素标记抗嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗体IgG   0.2ml
Anti-CCL28/FITC  荧光素标记粘膜相关上皮趋化因子MEC抗体IgG   0.2ml
Anti-CCP/FITC  荧光素标记兔抗瓜氨酸环肽抗体IgG   0.2ml
Anti-CCR-1/FITC  荧光素标记趋化因子受体1抗体IgG   0.2ml
Anti-CCR-2/5/FITC  荧光素标记CC趋化因子受体2/5抗体IgG   0.2ml