大鼠视网膜色素上皮细胞实验方法

1.产品名称：大鼠视网膜色素上皮细胞实验方法

2.组织来源：视网膜组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

大鼠视网膜色素上皮细胞分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。*神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处zui多。第二层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力zui强。视网膜色素上皮（RPE）位于脉络膜和光感受器细胞外节之间，是视网膜下腔和脉络膜血管之间的离子、水、营养物质和代谢终产物转运通道；主要是由单层色素上皮细胞所构成，排列十分规则。视网膜色素上皮参与*循环，吞噬脱落的光感受器细胞外节以维持光感受器细胞兴奋性，并分泌多种生长因子，帮助维持脉络膜血管内皮细胞和光感受器细胞的结构完整性。细胞呈多角形，细胞分为三部分，即顶部、体部和基底部。视网膜色素上皮细胞无再生能力，细胞死亡后不被替换，而是邻近的细胞向侧面滑动，以*死亡细胞遗留下来的空间。视网膜色素上皮位于脉络膜和光感受器细胞外节之间，是视网膜下腔和脉络膜血管之间的离子、水、营养物质和代谢终产物转运通道。视网膜色素上皮参与*循环，吞噬脱落的光感受器细胞外节以维持光感受器细胞兴奋性，并分泌多种生长因子，帮助维持脉络膜血管内皮细胞和光感受器细胞的结构完整性。

本公司的大鼠视网膜色素上皮细胞采用*-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经PCK免疫荧光和Dopa染色鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

M199、FBS、上皮细胞生长添加剂、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等

优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
) CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 4 (BMP4) 96T Y17875 Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
信号素3A(SEMA3A)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Semaphorin 3A (SEMA3A) 96T Y17876 Homo sapiens (Human)
*/*激酶39(STK39)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Serine/Threonine Kinase 39 (STK39) 96T Y17877 Homo sapiens (Human)
生长激素(GH)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Growth Hormone (GH) 96T Y17878 Chicken (Gallus)
神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) 96T Y17879 Rattus norvegicus (Rat)
白介素4(IL4)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Interleukin 4 (IL4) 96T Y17880 Bos taurus; Bovine (Cattle)
补体1抑制因子(C1INH)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Complement 1 Inhibitor (C1INH) 96T Y17881 Homo sapiens (Human)
高迁移率族蛋白1(HMG1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for High Mobility Group Protein 1 (HMG1) 96T Y17882 Homo sapiens (Human)
氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Oxidized Low Density Lipoprotein (OxLDL) 96T Y17883 Mus musculus (Mouse)
纤溶酶原激活物抑制因子2(PAI2)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Plasminogen Activator Inhibitor 2 (PAI2) 96T Y17884 Homo sapiens (Human)
纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法) CLIA Kit for Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1) 96T Y17885  
Anti-Tumstatin/Col4a3/FITC  荧光素标记肿瘤抑素抗体IgG   0.2ml
Anti-TWIST protein/FITC  荧光素标记TWIST转录因子蛋白抗体IgG   0.2ml
Rabbit Anti-human Fibrinogen/HRP  辣根过氧化物酶标记可溶性纤维蛋白原抗体IgG   0.1ml
Rabbit Anti-human Fibrinogen/FITC  荧光素标记纤维蛋白原IgG   0.2ml
Goat Anti-human Fibrinogen/HRP  辣根过氧化物酶标记羊抗*   0.1ml
Anti-TY3H/FITC (Tyrosine Hydroxylase )  荧光素标记*羟化酶抗体IgG   0.2ml
Anti-TNK1/FITC  荧光素标记非受体型*蛋白激酶Tnk1抗体IgG   0.2ml
Anti-Phospho-TNK1 (Tyr277)/FITC  荧光素标记磷酸化非受体型*蛋白激酶Tnk1抗体IgG   0.2ml
Anti-Phospho-Tyk2 (Tyr1054/1055)/FITC  荧光素标记磷酸化非受体*蛋白激酶2抗体IgG   0.2ml
Anti-Tyk2/Non receptor tyrosine protein kinase 2/FITC   荧光素标记非受体*蛋白激酶2抗体IgG   0.2ml
Anti-Tyrosinase/FITC  荧光素标记*酶抗体IgG   0.2ml
Anti-T Beta10/FITC  荧光素标记*β10抗体IgG   0.2ml
Anti-Ubiquitin/FITC  荧光素标记泛素蛋白抗体IgG   0.2ml
Anti-UCN/FITC  荧光素标记新型血管活性因子UCN抗体（人）IgG   0.2ml
Anti-UCN/FITC  荧光素标记新型血管活性因子UCN抗体(小鼠、大鼠)IgG   0.2ml
Anti-Urocortin 3/FITC  荧光素标记尿皮质素UCN3抗体IgG   0.2ml
Anti-UCP-1/FITC  荧光素标记线粒体脱偶连蛋白1抗体IgG   0.2ml