大鼠心肌细胞操作步骤

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

1.产品名称：大鼠心肌细胞操作步骤

2.组织来源：心脏组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

大鼠心肌细胞分离自心脏组织；心脏是脊椎动物身体中zui重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成，左心房、左心室、右心房、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开，故互不相通，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣），这些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。心肌细胞呈菱形、多边形等不规则形状；细胞培养2h后开始贴壁，呈梭形；到12h左右，细胞开始伸出伪足，呈菱形、多角形；细胞分离培养48h以后，大部分伸出伪足、呈巴掌状，部分心肌细胞会出现搏动；心肌细胞为终末分化细胞，在体外不增殖。体外培养的心肌细胞可保持结构及功能上的某些特点，并具有自发性节律搏动，且心肌细胞的培养具有简便、定量、重复性好以及不受神经体液因素的影响等特点。利用培养的心肌细胞在探索非血液动力学因素所致的心肌肥厚的调节，研究心肌细胞的生物力学、凋亡、受体下调、缺血预处理、信号通路、对作用于心脏的新药进行筛选并对其安全性进行评价以及从培养的心肌细胞中提取有价值的生物因子等方面具有广阔的应用前景，对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

本公司的大鼠心肌细胞采用胶原酶-*联合消化法结合差速贴壁法，并用化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经α-Sarcometric Actin、MF-20免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM[H]、FBS、Penicillin、Streptomycin等

冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
超氧化物歧化酶1(SOD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17222 CLIA Kit for Amphiregulin (AREG) 96T Chicken (Gallus)
丙二醛(MDA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17223 CLIA Kit for Amphiregulin (AREG) 96T Sus scrofa; Porcine (Pig)
60kD热休克蛋白(HSPD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17224 CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1) 96T Homo sapiens (Human)
60kD热休克蛋白(HSPD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17225 CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1) 96T Mus musculus (Mouse)
60kD热休克蛋白(HSPD1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17226 CLIA Kit for Atonal Homolog 1 (ATOH1) 96T Rattus norvegicus (Rat)
血管紧张素原(AGT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17227 CLIA Kit for Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2) 96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
血管紧张素原(AGT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17228 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Homo sapiens (Human)
血管紧张素原(AGT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17229 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Mus musculus (Mouse)
脂质转运蛋白(CETP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17230 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Rattus norvegicus (Rat)
神经型一氧化氮合酶()检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17231 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Oryctolagus cuniculus (Rabbit)
神经型一氧化氮合酶()检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17232 CLIA Kit for Connective Tissue Growth Factor (CTGF) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
神经型一氧化氮合酶()检测试剂盒(酶联免疫吸
Anti-GITR    PI3K  磷脂酰肌醇激酶（抗原） X57336  0.1ml
Anti-Glasses Snake poison Protein   BMP4(bone morphogenetic protein 4)  骨形态发生蛋白4（抗原） X57337  0.2ml
Anti-GLI1   PLGF (Placenta growth factor)  小鼠胎盘生长因子（多肽抗原） X57338  0.2ml
Anti-GLP-1   PLGF (Placenta growth factor)  胎盘生长因子（多肽抗原） X57339  0.1ml
Anti-GLP-2   PLGF (Placenta growth factor fragment)(human)  人胎盘生长因子（多肽抗原） X57340  0.2ml
Anti-GLUT1   PP-1  蛋白磷酸酯酶-1（抗原） X57341  0.1ml
Anti-GLUT2   BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)  骨成型蛋白受体1A抗原 X57342  0.1ml
Anti-GLUT3   PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor)  D型-过氧化酶活化增生受体(多肽） X57343  0.2ml
Anti-GLUT4   PP-2A (protein phosphatase 2A)  蛋白质磷酸酶-2A（抗原） X57344  0.1ml
Anti-Glycoprotein  [Rubella virus]   BOb-1(B-cell oct-binding protein 1)  B细胞特异性转录因子抗原 X57345  0.2ml
Anti-GPA33   PP-2B alpha 1   蛋白磷酸酯酶-2B 催化亚单位（抗原） X57346  0.2ml
Anti-GPC3   PR (Progestogerone receptor)  孕激素受体（抗原） X57347  0.1ml
Anti-GR    PS-1(NT)，Presennillin-1(S182)  早老素蛋白-1（抗原） X57348  0.1ml
Anti-GRK1    PS-1，Presennillin-1(CT)  早老素蛋白-1（S182） X57349  0.2ml
Anti-GRK2    BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat)  癌易感基因1抗原(小鼠 大鼠) X57350  0.2ml
Anti-GRM2    BRCA1  癌易感基因1抗原 X57351  0.2ml
Anti-GRM3    PSD-95   突触后密度蛋白95（抗