大鼠结肠平滑肌细胞实验方法

1.产品名称：大鼠结肠平滑肌细胞实验方法

2.组织来源：结肠组织

3.产品规格：5×10^5cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

大鼠结肠平滑肌细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠平滑肌细胞主要分布于黏膜肌层和肌层的内环形、外纵行平滑肌；结肠运动少而缓慢，对刺激的反应也较迟缓。结肠平滑肌在食物消化与吸收、肠道运动和物质分泌、诱发全身炎症反应以及细胞内信号转导途径等研究中起着重要的作用。结肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。结肠平滑肌运动活性受到神经递质、胃肠激素和药物等因素的调节。随着现代胃肠动力学研究的进展，对胃肠运动的研究已从器官、组织水平发展到细胞、分子水平，要求在胃肠道单个平滑肌细胞标本上来完成各种电生理、药理和分子生物学等实验。体外培养细胞，由于影响因素单一，是研究细胞功能以及相应的细胞信号转导机制的基础。

本公司的大鼠结肠平滑肌细胞采用*-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经alpha-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5.培养基信息：

DMEM[H]、FBS、平滑肌细胞生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

优势：
1、细胞株种类齐全，包括肿瘤细胞、正常细胞、耐药细胞株，如：人滑膜细胞，人胃癌细胞，人细胞，人肾近曲小管上皮细胞，肝癌细胞，心肌细胞，子宫内膜细胞等
2、*，专业的细胞培养技术指导
3、购买本公司的细胞株，免费复苏
4、客户收到细胞后一天回传细胞图片，三天回传细胞生长状态图片，五天内有问题公司负责重发，超过五天时限至一个月内重发细胞收半价，超过一个月重发全额收费。
5、经济、实惠、可靠，完善、稳定的实验体系，优秀的科研队伍，*的实验设备、准确可靠的实验结果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我们还可以提供Elisa试剂盒、细胞株、抗体、血清、培养基、常用生化试剂、耗材。
操作步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸钠 0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。
2、培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3、冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二、细胞处理：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1)弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3)按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4)将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
冷冻保存方法一：冷冻管置于4℃300分钟→(-20℃30分钟*)→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽*储存。
冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期储存。-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，也可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

蛋白*磷酸酶受体K(PTPRK)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17490 CLIA Kit for Myostatin (MSTN) 96T Rattus norvegicus (Rat)
蛋白*磷酸酶受体B(PTPRB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17491 CLIA Kit for Interleukin 21 (IL21) 96T Homo sapiens (Human)
三叶因子1(TFF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17492 CLIA Kit for Interleukin 21 (IL21) 96T Mus musculus (Mouse)
雌激素受体α(ERα)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17493 CLIA Kit for Interleukin 21 (IL21) 96T Rattus norvegicus (Rat)
胆囊收缩素B受体(CCKBR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17494 CLIA Kit for Interleukin 28A (IL28A) 96T Homo sapiens (Human)
催产素(OT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17495 CLIA Kit for Interleukin 28A (IL28A) 96T Mus musculus (Mouse)
凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17496 CLIA Kit for Interleukin 25 (IL25) 96T Homo sapiens (Human)
V-Myb髓细胞组织增生病毒癌基因同源物(MYB)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17497 CLIA Kit for Interleukin 25 (IL25) 96T Mus musculus (Mouse)
70kDa热休克蛋白4(HSPA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17498 CLIA Kit for Interleukin 25 (IL25) 96T Rattus norvegicus (Rat)
泛素连接酶E3A(UBE3A)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) M17499 CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 2 (GDF2) 96T Homo sapiens (Human)
Anti-SP    IFABP(Intestinal Fatty acid binding protein)  小肠型脂肪酸结合蛋白抗原 X57752  0.1ml
Anti-SP-A    IFITM1 (interferon induced transmembrane protein 1)  干扰素诱导跨膜蛋白1抗原 X57753  0.2ml
Anti-SPAG5/map126   human IFN- Alpha (Interferon Alpha )  干扰素-α抗原（人） X57754  0.1ml
Anti-SPARC    IFNGR1/CD119 peptide  干扰素-gamma受体1抗原 X57755  0.2ml
Anti-SP-B    IGFBP-2 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 2)  胰岛素样生长因子结合蛋白-2（多肽） X57756  0.1ml
Anti-Spectrin-α    IGFBP-3 (Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3)C-term  胰岛素样生长因子结合蛋白-3抗原 X57757  0.2ml
Anti-Spindlin 1/SPIN-2   IGF-IIBP3(Insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 3)  胰岛素样生长因子2 mRNA 结合蛋白3抗原 X57758  0.2ml
anti-SPY    IKB Beta (Inhibitor of KB)  KB抑制蛋白β(多肽) X57759  0.1ml
Anti-SRC    IKB Alpha (Inhibitor of KB Alpha)  KB抑制蛋白α抗原 X57760  0.2ml
Anti-SRG2    IL-12(Interleukin-12)  白介素12抗原（白细胞介素-12） X57761  0.2ml
Anti-SSA/RO    IL-12(Interleukin-12)human peptide  白介素12抗原(人) X57762  0.1ml
Anti-SSB/La   IL-12R Beta2/IL12RB2 peptide  白细胞介素-12受体β2抗原 X57763  0.2ml
Anti-SSTR1    IL-13(Interleukin-13)  白介素13抗原 X57764  0.2ml
Anti-SSTR2    IL-14/Taxilin alpha  白介素14抗原 X57765  0.2ml
Anti-SSTR5    IL-15(Interleukin-15)  白细胞介素-15抗原 X57766  0.2ml
Anti-STAT2    IL-16(Interleukin-16)  白介素