人肾癌Wilms细胞；G401培养

【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。

细胞名称  人肾癌Wilms细胞；G401培养
形态特性   上皮样
生长特性  贴壁生长
特征特性   该细胞来源于一名3个月大的婴儿的肾Wilms瘤，由于该类肿瘤分类的改变，经Garvin等鉴定后发现该细胞来源于肾横纹肌样瘤。该细胞分泌肾母细胞生长因子（nephroblast growth factor，NB-GF)。 
培养条件   McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  10%FBS
传代方法   1:3传代；3~4天1次。
传代情况  C5
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  培养法（-）
STR   Amelogenin：X，Y；CSF1PO：11，13；D13S317：9，14；D16S539：12；D18S51：14；D19S433：13，14；D21S11：31，32.2；D2S1338：18，24；D3S1358：16，18；D5S818：13；D7S820：11，14；D8S1179：13，14；FGA：24，27；TH01：8，9.3；TPOX：8，11；vWA：16；
同工酶  
染色体   亚二倍体，XY
使用权限  A类

复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
LIX1    英文名称：    LIX1抗体    ?0.2ml
LOX 1    英文名称：    凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体抗体    ?0.1ml
MD1    英文名称：    MD-1蛋白抗体    ?0.1ml
MD-2    英文名称：    MD-2蛋白抗体    ?0.1ml
LYVE-1    英文名称：    淋巴管内皮透明质酸受体抗体    ?0.1ml
liver FABP    英文名称：    肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体    ?0.2ml
Luciferase    英文名称：    荧光素酶抗体    ?0.2ml
LAP3    英文名称：    *氨基肽酶3抗体    ?0.1ml
LFABP/FABP-1    英文名称：    肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体    ?0.2ml
LPP2    英文名称：    肿瘤抑制基因LPP2抗体    ?0.2mlPV ELISA Kit  鱼卵黄高磷蛋白    Multi-class antibodies    规格：     48T
MHC ELISA Kit  鱼类主要组织相容复合体    Multi-class antibodies    规格：     48T
C3 ELISA Kit  鲑鱼补体蛋白3    Multi-class antibodies    规格：     48T
C4 ELISA Kit   鲑鱼补体蛋白4    Multi-class antibodies    规格：     48T
IL-1 Alpha ELISA kit  鱼类白介素1α    Multi-class antibodies    规格：     48T
IL-1 Beta ELISA Kit  鱼类白介素1β    Multi-class antibodies    规格：     48T
VTG ELISA Kit  鲤鱼卵黄蛋白原    Multi-class antibodies    规格：     96T
GnRH ELISA Kit   鱼类促腺激素释放激素    Multi-class antibodies    规格：     48T
Fish Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit  鱼类三碘甲状腺原氨酸    Multi-class antibodies    规格：     48T
Fish Cortisol ELISA Kit  鱼类*    Multi-class antibodies    规格：     48T
Fish high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit   鱼类超敏C反应蛋白    Multi-class antibodies    规格：     48T