鱼源性成分核酸检测试剂盒（荧光PCR法）
产品货号：PA67A\01
版 本 号：Version 1.0
包装规格：50 T/盒
产品说明：
鱼源性成分核酸检测试剂盒（荧光PCR法）,采用Taqman探针技术，以鱼源性成分的保守基因为靶点设计特异性引物和探针，用于样品中鱼源性成分核酸的辅助检测。本产品引入了dUTP/UDG系统，可降解含U的ssDNA和dsDNA，消除由PCR产物导致的交叉污染。
产品组分：
序号 | 组分名称 | 含量 |
1 | 酶反应液 | 650 μL/管 |
2 | 引探预混液 | 390 μL/管 |
3 | 阴性对照 | 100 μL/管 |
4 | 阳性对照 | 100 μL/管 |
注：不同批号产品的成分之间不可以混用或互换！！！
储存条件与有效期：
-20℃避光储存，有效期12个月。干冰运输。重复冻融小于5次。
适用仪器：
ABI 7500、宏石96P、Bio-Rad CFX96实时荧光定量PCR仪等。
样品要求：
1. 适用样品类型
动物组织制品、食品、饲料或血液样本；
要求送检新鲜样品，禁止反复冻融！
2. 样品处理（核酸提取区）
参照《NY/T 541-2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范》等标准进行样品前处理， 使用商业化试剂盒提取样品中的核酸。提取后的核酸应立即检测，否则冻存于-20℃，保存时间不超过6个月，禁止反复冻融！
检测方法：
为了防止污染，实验需分区操作！！！
注：核酸提取参照样品要求，在核酸提取区或样品处理区进行。
1. 试剂准备（在试剂准备区进行）
取出试剂盒中各组分以及自备试剂，放置室温，待温度平衡至室温，混匀后备用。随后按照每个反应为
（1）12.5μL酶反应液+7.5μL引探预混液来配制荧光混合液。当待检样品数为n时，所需反应数N=样品数(n)+阳性对照(1)+阴性对照(1)。
（2）根据检测样品数量，建议每次检测均设置阴性对照和阳性对照。将所需数量（N）的荧光混合液分配到每个PCR管（或八连管）中，20 μL/管。
当准备使用时，再转移到样品处理区。
1. 样品加样（在样品处理区进行）
在每个PCR管中分别加入5 μL经提取的待测样品核酸、阴性对照和阳性对照，盖上管盖， 瞬时离心，使液体全部沉于管底。
2. qPCR扩增（在扩增与分析区进行）
（1）荧光通道选择
荧光基团选择FAM通道检测鱼源性成分；淬灭基团设置为none。如ABI qPCR仪，还需设置Passive Reference为ROX。其他仪器请参考仪器说明书。
（2）qPCR扩增程序设置
设置反应体系为25 μL.
3. 结果分析（以ABI 7500 qPCR仪为例）
反应结束后，qPCR仪将自动生成结果。若仪器自动生成的扩增曲线或阈值线有异常，用户可根据实际情况自行进行调整，基线Start值可以在 3~10，基线End值可设在5~20，调整各扩增曲线的基线区相对水平即可。点击Analyze进行分析。
4. 质量控制
试剂盒中各控制项应符合下列要求，否则实验无效。
阳性对照 | 阴性对照 | |
FAM通道 | Ct≤35 | 无Ct值或Ct＞40 |
