人胃癌组织成纤维细胞

细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

人胃癌组织源成纤维分离自患有胃癌病人的胃癌组织；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在我国各种恶性肿瘤中发病率居，胃癌可发生于胃的任何部位，其中半数以上发生于胃窦部，胃大弯、胃小弯及前后壁均可受累，绝大多数胃癌属于腺癌。在胃癌侵袭和转移的过程中，涉及诸多复杂的过程，如细胞外基质的硬化和降解、新生血管的形成等，而这些过程会直接或间接的引起肿瘤微环境（Tumor mircoenvironment）的改变。肿瘤微环境即肿瘤细胞生存的外部环境，由不同种类的非肿瘤性的细胞与细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）构成，包括纤维细胞，免疫细胞，内皮细胞，间充质干细胞等，肿瘤细胞通过调控这些间质细胞，创造出有利于自身侵袭转移的条件，从而使得肿瘤得到进展。越来越多的证据表明，肿瘤微环境的改变在肿瘤进展中扮演着重要的角色。在肿瘤微环境中，研究多也是主要的间质细胞是肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由肿瘤周边的正常成纤维细胞和成纤维细胞样细胞演化而来。胃癌组织源成纤维细胞多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。刚分离的胃癌组织源成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

方法简介：

公司实验室分离的人胃癌组织成纤维采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人胃癌组织成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 成纤维细胞样

传代特性 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

小鼠神经生长导向因子(Slit2) ELISA 试剂盒

Mueller tube inhibitory substance / ai Mueller tube hormone (MIS/AMH) ELISA Kit 人缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(MIS/AMH)试剂盒

HumanN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit 人N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯(AcSDKP)试剂盒 96T/48T 进口分装

GoatBeta-Endorphin,β-EP试剂盒山羊β内啡肽(β-EP)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母黑色素含量比色法定量试剂盒20次

MouseCollageypeⅡ,ColⅡELISAKit小鼠Ⅱ型胶原(ColⅡ)试剂盒规格：96T/48T

小鼠髓过氧化物酶   英文名称：   Mouse Myeloperoxidase   英文缩写：   MPO

小鼠巨噬细胞趋化蛋白-1   英文名称：   monocyte chemotactic protein 1   英文缩写：   MCP-1

小鼠巨噬细胞趋化蛋白-3   英文名称：   monocyte chemotactic protein 3   英文缩写：   MCP-3

小鼠M-能受体结合力   英文名称：   M—cholinoceptor binding capacity   英文缩写：   MCBC

脂肪酸合成酶单克隆抗体

小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat leinizing hormone releasing hormone (LHRH) ELISA Kit 大鼠黄体生成素释放激素(LHRH)试剂盒

HumanCytochromeP450c21/21-hydroxylase,CYP21AELISAKit 人细胞色素P450c21A/21-羟化酶(CYP21A)试剂盒 96T/48T 进口分装

cit瓜规格：96T/48T

载玻片细胞钙ATP酶PMCA蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

Mouseeosinophilcationicprotein,ECPELISAKit小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)试剂盒规格：96T/48T

VAC14蛋白抗体

WFDC2重组狗 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 (Fc 标签) Protein

OAT-1 (Organic anion transporter 1 0.5mgOAT-1 (Organic anion transporter 1)human 阴离子转运蛋白-1(人源)

TRIB2重组人 TRIB2 / TRB2 蛋白 Protein

CHN1 Protein Human 重组人 CHN1 / Chimerin 1 蛋白

CHL1 Protein Mouse 重组小鼠 CHL-1 蛋白

人胃癌组织成纤维细胞OAT-1 (Organic anion transporter 1 0.5mgOAT-1 (Organic anion transporter 1)human 阴离子转运蛋白-1(人源)

CHN1 Protein Human 重组人 CHN1 / Chimerin 1 蛋白

WFDC2重组狗 WAP5 / WFDC2 / HE4 蛋白 (Fc 标签) Protein

CHL1 Protein Mouse 重组小鼠 CHL-1 蛋白

TRIB2重组人 TRIB2 / TRB2 蛋白 Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。