细胞传代步骤:
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞简介:
鸭胚成纤维分离自胚胎;成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞,能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子,故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性,且分泌效果优于外源添加的一些因子,而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境,故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。
方法简介:
实验室分离的鸭胚成纤维采用消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的鸭胚成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品名称 | 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | |
组织来源 | 胚胎 | 产品货号 | YS-01X8550 |
生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息:
培养基:含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:成纤维细胞样
传代特性:可传3-5代左右;3代以内状态佳
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
鸭胚成纤维体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的佳培养状态。
细胞复苏步骤:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
公司正在出售的产品:
大鼠低密度脂蛋白(LDL-C)试剂盒 ,英文名: LDL-C ELISA Kit
Porcine angiotensin II (ANG- II) ELISA Kit 猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒
菌核酸试剂盒(荧光PCR法) 48T
CLIAKitforLR/Ob-RELISAKit大鼠苗条素受体
通用抗体稀释溶液10/100毫升
ELISAKitAmAC-1鸡巨噬细胞替代激活相关化学因子1
小鼠胰岛素(INS)试剂盒
小鼠原激活肽(TAP)试剂盒
小鼠(ypsin)试剂盒
小鼠合成酶(NOS)试剂盒
Verprolin同源结构域包含蛋白3抗体
3号染色体开放阅读框20抗体
SDC1重组小鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 蛋白 Protein
Akt/PKB 蛋白激酶B(抗原 0.5mgAkt/PKB 蛋白激酶B(抗原)
IL17A重组人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein
CD40LG Protein Human 重组人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)
KIT Protein Rat 重组大鼠 KIT / c-KIT 蛋白 (Fc 标签)
Akt/PKB 蛋白激酶B(抗原 0.5mgAkt/PKB 蛋白激酶B(抗原)
CD40LG Protein Human 重组人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 标签)
SDC1重组小鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 蛋白 Protein
KIT Protein Rat 重组大鼠 KIT / c-KIT 蛋白 (Fc 标签)
IL17A重组人 IL17 / IL17A 蛋白 Protein
鸭胚成纤维细胞小鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA pcr检测试剂盒
Rat complexed prostate specific aigen (CPSA) ELISA Kit 大鼠复合前列腺特异性抗原(CPSA)试剂盒
Humanparaoxonase,PONELISAKit 人酶(PON)pcr检测试剂盒分装
Aflatoxin,AFT试剂盒霉毒素(AFT)试剂盒规格:96T/48T
油脂DNA萃取试剂盒10次
MouseIerferonα,IFN-αELISAKit小鼠α干扰素(IFN-α)试剂盒规格:96T/48T
细胞冻存步骤:
待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;
1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,细胞变圆脱落后,加入2ml培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取