人视网膜微血管内皮细胞

细胞传代步骤：

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞简介：

人视网膜微血管内皮分离自视网膜组织；视网膜居于眼球壁的内层，是一层透明的薄膜。视网膜由色素上皮层和视网膜感觉层组成，两层间在病理情况下可分开，称为视网膜脱离。色素上皮层与脉络膜紧密相连，由色素上皮细胞组成，它们具有支持和营养光感受器细胞、遮光、散热以及再生和修复等作用。组织学上视网膜分为10层，由外向内分别为：色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层、内界膜。视网膜内层为衬于血管膜内面的一层薄膜，有感光作用；后部鼻侧有一视神经乳头。视网膜上的感觉层是由三个神经元组成。神经元是视细胞层，专司感光，它包括锥细胞和杆细胞。视杆细胞主要在离中心凹较远的视网膜上，而视锥细胞则在中心凹处多。层叫双节细胞，约有10到数百个视细胞通过双节细胞与一个神经节细胞相联系，负责联络作用。第三层叫节细胞层，专管传导。视网膜是一层菲薄的但又非常复杂的结构，它贴于眼球的后壁部，传递来自视网膜感受器冲动的神经纤维跨越视网膜表面，经由视神经到达出口。视网膜的分辨力是不均匀的，在黄斑区，其分辨能力强。它是组成血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在视网膜血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。由于从不同的组织和器官获得的内皮细胞具有不同的特性，在脑和视网膜中，这些内皮细胞具有内屏障的功能，在调节血管生理状态，释放血管活性物质以及新生血管的形成中发挥着重要作用，体外分离培养RCEC对研究视网膜血管性疾病发生发展的病理生理机制以及疾病的早期防治具有重要临床意义。

方法简介：

公司实验室分离的人视网膜微血管内皮采用胶原酶-混合消化法结合密度梯度离心法、后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人视网膜微血管内皮经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

公司正在出售的产品：

大鼠组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)试剂盒 ，英文名： HAT1 ELISA Kit

Nude mouse protein phosphatase (PP) ELISA Kit 裸鼠蛋酸酶(PP)试剂盒

MouseIerleukin-7,IL-7ELISAkit 小鼠白介素7(IL-7)试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforHumanmajorhistocompatibilitycomplexI,MHCI/HLAIELISAKit人主要组织相容性复合体Ⅰ类

土壤α活性DNS比色法定量试剂盒20次

ELISAKitACA-IgM大鼠抗心0脂抗体IgM

小鼠褪黑素(MT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠热休克因子1(HSF1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血小板因子3(PF-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体

小鼠透明质酸结合蛋白(HABP)ELISA 试剂盒 96T/48T

Rat receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (RANKL) ELISA Kit 大鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)试剂盒

HumanICEprotease-activatingfactor,IRAPELISAKit 人ICE蛋白酶激活因子(IRAP)试剂盒 96T/48T 进口分装

ChickensolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCR试剂盒鸡可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)试剂盒规格：96T/48T

载玻片细胞PDGF-A蛋白表达荧光显微镜试剂盒10/20次

MouseFibrinogen,FbgELISAKit小鼠血纤蛋白原(Fbg)试剂盒规格：96T/48T

神经调节蛋白3抗体

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 Protein

热休克蛋白47(HSP47)重组蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 47 (HSP47)

FAM20B重组人 FAM20B / Gxk1 蛋白 (Fc 标签) Protein

CFH Protein Human 重组人 Complement Factor H / CFH 蛋白

NA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (R292K mutation) (高活性)

人视网膜微血管内皮细胞热休克蛋白47(HSP47)重组蛋白 Recombinant Heat Shock Protein 47 (HSP47)

CFH Protein Human 重组人 Complement Factor H / CFH 蛋白

EPHB4重组人 EphB4 / HTK 蛋白 Protein

NA Protein H3N2 重组甲型流感 H3N2 神经酸酶 (Neuraminidase / NA) (R292K mutation) (高活性)

FAM20B重组人 FAM20B / Gxk1 蛋白 (Fc 标签) Protein

细胞冻存步骤:

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，细胞变圆脱落后，加入2ml培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。