人牙周膜干细胞

人牙周膜干细胞

细胞简介：人牙周膜干细胞分离自牙周膜组织；  牙周膜(牙周韧带、牙周间隙)是由致密结缔组 织所构成。多数纤维排列成束，  纤维的一端埋于牙骨质内，另一端则埋于牙槽窝  骨壁里，使牙齿固位于牙槽窝内；牙周膜内有神经、血管、淋巴和上皮细胞等。   成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，  由胚胎时期的间充质细 胞分化而来。间充质干细胞(mesenchymal stem cells ，  MSCs)来源于胚胎时期  的中胚层组织，  具有很强的自我复制和多向分化潜能，具有向脂肪细胞、成骨细  胞、软骨细胞及肌细胞等多种终末细胞定向分化的能力，运用 MSCs来修复软骨  损伤具有很好的应用前景，目前已能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等组织  以及羊水、脐带、脐带血中分离和制备间充质干细胞。牙周膜干细胞参与了牙周  组织的病变、修复及再生过程。现在，利用牙周膜干细胞建立体外模型，已经成  为有关员研究牙周组织疾病的重要手段。

培养基：原代间充质干细胞培养体系

换液频率：每2-3天换液一次

消化液：0.25%胰dan白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

细胞基本属性：

原代细胞培养方法：

1.准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。

3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分钟。

4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。

5.消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6.分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。

7.计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。

8.培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶盖需拧松半圈。

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注意事项：

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。