人NK细胞

细胞培养注意事项：

公司产品仅用于科研关于原代细胞培养的注意事项。原代细胞培养是一项非常重要的实验技术，掌握好这些注意事项，能让你的实验更顺利。

首先，无菌操作是关键。一定要保持操作环境的清洁，避免细菌或霉菌污染，否则实验就会失败。

其次，选择适合的培养基和血清也很重要。不同细胞对培养基和血清的需求不同，所以要根据细胞类型来选择合适的培养基和血清。

另外，也是细胞培养中的成分。要新鲜配制，在贮存过程中也要定期补充。

在细胞培养过程中，静置培养也是非常重要的。细胞在消化分离后需要一定的时间来适应新环境，所以在这段时间内要避免频繁取出培养瓶观察。

此外，消化时间也要控制得当。通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可，过长的消化时间会导致细胞损伤加重，影响细胞培养成活率。

最后，对于一些特殊类型的细胞，可能需要添加一些特殊的生长因子来促进细胞生长和增殖。但需要注意的是，这些生长因子的费用通常较高。

一、细胞基本属性

细胞名称：人NK细胞

组织来源：外周血

种属来源：人

细胞简介：自然杀伤细胞(natural killer cell ，  NK)是机体重要的免疫细胞 ，不仅与抗肿瘤、   抗病毒感染和免疫调节有关 ，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病  的发生。一种稳定表达在NK和LAK细胞表面的LAK-1分子 ，  120kDa ，  NK细胞在 IL-2条件下培养20天LAK-1仍为阳性 ，而HNK-1(CD57)  和CD16部分消失。  LAK 的杀伤活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。

自然杀伤细胞刺激因子  (natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 对NK细胞 有刺激作用。  IL-2、  IL-12、  IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素(leukoregulin,LR) 对NK细胞的活化和分化有正调节作用 ，   体外培养时加入上述细胞因子可明显提  高NK的杀伤活性。前列腺素 (PG)E1、  E2、  D2和肾上腺皮质激素等对NK细胞的  活性有抑制作用。

培养基：原代NK细胞培养体系

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：悬浮培养

传代特性：根据细胞特性传代

消化液：0.25%胰dan白酶

培养条件：气相：空气 ，95%；  CO2 ，  5%

二、使用方法：

人NK细胞是一种悬浮培养细胞，细胞形态呈，在技术部标准操作流程下，细胞可传根据细胞特性传代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。

3. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

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