酶联免疫试剂盒

酶联免疫试剂盒试剂盒所含试剂：
试剂 A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（选用）
试剂 B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL
试剂 C （*分装）已稀释的即用型 ABCG2 一抗（2.5ml）
试剂 D （*分装）*化羊抗兔 IgG 1 支（浓度 1.5 mg/mL，稀释比为 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液 20ml
试剂 E HRP-SA 复合物 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200）100 μL
试剂 F DAB 显色液 5ml
酶联免疫试剂盒用户自备试剂：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羟基氨基甲烷 1.21g
氯化钠 7.6g
加蒸馏水 800mL，浓盐酸调 pH 值至 7.2~7.4，后定容至 1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸 0.38g
柠檬酸三钠 2.45g
加蒸馏水 900mL，浓盐酸调 pH 值至 6.0，后定容至 1000mL或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
柠檬酸三钠 2.45g加蒸馏水 700mL，用 10mM NaOH 调 pH 值至 8.0，后定容至 1000Ml
3. 缓冲甘油封固剂 10 mL
4. Tween 20 5 mL石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案 ）：
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书*方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min，TBS 洗涤（2×2min）（体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，
5 步封闭。5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的*化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育30 min；
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min；
12.加 HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37℃湿盒中孵育 30 min；
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
酶联免疫试剂盒注意事项
1  使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
2  不要使用过期试剂盒。
3  试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。
4  标准品中含有三聚氰胺，使用时应特别注意，操作时应带手套。
5  终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6  不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
7  不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响