美国NovaBios黄热病毒酶联免疫试剂盒（ELISA方法）
广州健仑生物科技有限公司
本公司专业供应各种进口品牌黄热病检测试剂盒，包括美国的NovaBios、广州创仑等CDC品牌。主要包括胶体金、酶免、PCR等方法学。欢迎咨询
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黄热病毒核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）
美国CDC的黄热病毒诊断试剂——美国的NovaBios
美国NovaBios黄热病毒酶联免疫试剂盒（ELISA方法）
【黄热病简介】
黄热病，历*称为黄色杰克，黄色瘟疫或青铜约翰，是一种急性病毒性疾病。在大多数情况下，症状包括发热，寒战，食欲不振，特别是在背部的肌肉痛，和头痛。症状通常在五天内改善。在一些人在一天内改善，发烧回来，腹痛发生，肝损伤开始导致黄色皮肤。如果发生这种情况，出血和肾脏问题的风险也增加。
【检测原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特异性抗原。将对照或测试样品加入到合适的孔中并孵育。用洗涤缓冲液洗去游离组分。将HRP缀合的检测试剂加入到孔中。TMB底物用于显现HRP酶反应。TMB由HRP催化以产生在加入酸性停止溶液后变为黄色的蓝色产物。黄色的密度与板中捕获的样品的YFV-IgM/IgG量成比例。外径在微板读数器中在450nm下通过分光亮度计测量吸亮度，然后可以计算YFV-IgM/IgG的浓度。
产品规格：96T/盒
检测范围：定性
灵敏度：定性
储存和使用期：2-8℃ 储存12个月
产品应用：用于定性检测人血清，血浆，细胞培养上清液或任何生物液体中的YFV-IgM。
【套件组件】
1.一个96孔板预涂
2.阳性对照：0.5ml
3.阴性对照：0.5ml
4.洗涤缓冲液（30×）：20 ml。稀释：1:30
5.样品稀释缓冲液：6ml
6.6HRP酶联试剂（RTU）：6ml
7.终止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1
【需要材料但不提供】
1.37℃培养箱
2.酶标仪（波长：450nm）
3.精确的移液器和一次性移液器吸头
4.自动洗板机
5.ELISA振荡器
1.5ml管
7.板盖
8.吸收滤纸
9.100ml和1L体积量筒。
【操作程序】
A.制备样品和试剂
1. 样品
收集并立即分析测试样品（2小时内）后立即分离。或等分并长期储存在-20°C。避免多个冻融循环。
细胞培养上清：以约2000-3000×rpm离心20分钟，以去除沉淀，立即分析或分装，并储存于-20℃。
血清：在室温下凝结血清（约4小时）。以约2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析血清或等分，并储存在-20°C。
血浆：用柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
尿：在无菌容器中收集，以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
组织：组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。收集和冲洗样品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。称重样品并用PBS（Ph 7.4）匀化，并对细胞悬浮液进行超声处理。以2000-3000×rpm离心20分钟。立即测定或等分并储存在-80℃。
（注意：1.*凝结血液样品，离心，避免溶血和沈淀。 2.NaN3不能用作试验样品防腐剂，因为它抑制HRP。）
2.洗涤缓冲液
用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液30倍（1/30）（即将20ml浓缩洗涤缓冲液加入580ml蒸馏水中）。
B.测定程序
在使用前将试剂盒组分和样品平衡至室温。建议绘制每个测试的标准曲线。
1.在预涂板上分别设置阳性/阴性，测试样品和对照（零）孔，并记录它们的位置。
2.将50μl的阴性和阳性对照等分到设定的孔中。
3.向对照（零）孔中加入50μl样品稀释缓冲液。
4.向测试样品孔中加入50μl适当稀释的样品（样品稀释比例：1：5）。在底部加入溶液而不接触侧壁。摇动平板以混合内容物。
5.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
6.取下盖子并通过在吸收性滤纸或其他吸收材料上敲击板来丢弃板内容物。
7.弃去溶液，用洗涤缓冲液洗涤板5次。不要让孔在任何时候*干燥。
手动清洗：丢弃溶液，不要接触侧壁。将吸水滤纸或其他吸收材料上拍出液体。将洗涤缓冲液填满每个孔，并在ELISA振荡器上轻轻涡流2 分钟。丢弃内容物，并将吸收性滤纸或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自动洗涤：弃去所有孔中的溶液，并用洗涤缓冲液洗涤板5次（用缓冲液过量填满孔）。在zui后的洗涤之后，翻转该板并敲击吸收性滤纸或其它吸收材料。建议将清洗器设置为1分钟的浸泡时间。
8.向每个孔中加入50μlHRP结合物的试剂（对照孔除外）。在每个孔底部加入溶液，不要接触侧壁。
9.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
10.取下盖子，用洗涤缓冲液洗板5次。
11.向每个孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，盖上平板并在37℃下孵育15分钟。避免暴露于光。
12.向每个孔中加入50μl终止液，充分混匀。颜色应立即变为黄色。
13.阅读O.D.在微板读数器中在450nm的吸亮度在加入终止溶液的15分钟内。对于计算，（相对O.D.450）=（每个孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。标准曲线可以作为每种标准溶液（Y）的相对O.D.450与标准溶液（X）的相应浓度作图。可以从标准曲线插入样品的人类YFV-IgM浓度。
14.注意：如果稀释样品，稀释倍数乘以内插法得到稀释前的浓度。
C.结果确定
1.试验有效性：阳性对照的平均值≥1.00; 阴性对照的平均值≤0.10。
2.临界值（CUT OFF）计算：临界值=负控制的平均值+0.15
3.阴性结果：如果OD值<CUT OFF，样品为人YFV-IgM阴性。
4.阳性结果：如果OD值≥CUTOFF，样品为人类YFV-IgM阳性。
D.注意事项
1.在实验之前，离心每个试剂盒组分数分钟，将所有试剂倒入试管底部。
2.在混合或重新组装部件时避免起泡或气泡。
3.洗涤缓冲液可结晶并分离。如果发生这种情况，请加热管以溶解。
4.建议每个对照和样品一式两份或重复测量三次。
5.不要让板在任何时候*干燥！这可以使板上的生物材料失活。
6.不要重复使用移液器吸头和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中过期的组件或组件。
8.将TMB底物B储存在黑暗中，并且为了避免板温育对于温度差的边缘效应，建议在使用前在室温下使TMB底物平衡30分钟。用灭菌的吸头抽吸所需的剂量，不要将残留溶液倒回到小瓶中。
美国NovaBios
流行情况/黄热病 黄热病
人类记载的*次黄热病流行发生在1648年的墨西哥的尤卡坦半岛。此前在加勒比海地区已有该病存在。
17至19世纪，该病通过交通运输、人员流动传人北美和欧洲后，成为美洲、非洲及欧洲部分地区zui严重的传染病之一，曾造成人群大量死亡及部分社会活动瘫痪。
1741年，英国27000名士兵攻打哥伦比亚，因20000人感染黄热病而溃不成军；1762年英国殖民军侵略古巴，15000名士兵中8000人死于黄热病；
1793年，美国费城黄热病大流行，全市1/5人口死于黄热病，导致社会*解体。其后疫情沿密西西比河深人到北美中心地带，美国至少有50万人罹患此病；
1800年，西班牙发生黄热病，死亡至少6万人；
1851年，巴西首都里约热内卢因黄热病至少死亡23000人；
巴拿马运河开凿*期工程中曾因本病严重流行而迫使工程停顿；
1826年英国殖民者人侵非洲时发生本病，535名殖民军在两个月中死亡115人；
1940年以前，黄热病在非洲同样是大小流行不断造成人员大量死亡。
1959年，扎尹尔和苏丹相继出现暴发流行。1960～1962年埃塞俄比亚发生严重大流行，100万人口中约10%感染本病，其中死亡3万人。
20世纪60年代以来，非洲和南美洲的黄热病暴发一直未曾中断。每年向世界卫生组织报告的病例数波动在近百例至数千例不等。
1987～1991年间，黄热病在尼日利亚流行，几十万人受到感染。
2012年11月1日，位于苏丹西部的中达尔富尔州和南达尔富尔州有47名公民感染黄热病死亡，苏丹黄热病患者已超过92例。黄热病 至2012年11月5日，苏丹达尔富尔地区黄热病疫情，疑似病例达到194例，其中包括67例死亡病例，死亡率为34.5%。黄热病
病黄热病理/黄热病 黄热病
病原学
病原为黄热病病毒（yellow fever virus），属黄病毒科（family Flaviviridae）的黄病毒属（genus Flavivirus）（过去的虫媒病毒B组）与同属的登革热病毒等有交叉免疫反应。病毒颗粒呈球形，直径37～50nm，外有脂蛋白包膜，包膜表面有刺突。病毒基因组为单股正链RNA，分子量约为3.8×106 ，长约11kb，只含有一个长的开放读码框架，约96%的核苷酸在此框架内。黄病毒基因组分为二个区段：5'端1/4编码该病毒3个结构蛋白，即C蛋白（衣壳蛋白）、M蛋白（膜蛋白）和E蛋白（包膜蛋白）；3'端3/4编码7个非结构蛋白。基因组的5'端和3'端均有一段非编码区。
E蛋白是主要的包膜糖蛋白，含黄热病毒血凝素和中和抗原决定簇，可能是某些宿主细胞表面受体的配体，当它与受体结合，可对细胞产生感染。E蛋白可能是一种膜融合蛋白，可诱导病毒颗粒的包膜与细胞膜融合，促使病毒颗粒进入细胞而引起感染。M蛋白能导致病毒的感染性增加，并形成病毒颗粒的表面结构。非结构蛋白的作用尚不十分清楚，在病毒免疫反应中可能起重要作用。
黄热病病毒有嗜内脏如肝、肾、心等（人和灵长类）和嗜神经（小鼠）的特性。经鸡胚多次传代后可获得作为疫苗的毒力减弱株。易被热、常用消毒剂、黄热病、去氧胆酸钠等迅速灭活，在50%甘油溶液中可存活数月，在冻干情况下可保持活力多年。小鼠和恒河猴是常用的易感实验动物。
美国NovaBios
我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。
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Epidemic situation / yellow fever yellow fever
The first yellow fever epidemic recorded by humans in the 1648 Mexican Yucatan Peninsula. The disease had previously existed in the Caribbean.
From the 17th to the 19th century, the disease became one of the most serious infectious diseases in the Americas, Africa and parts of Europe through transportation and personnel transmission to North America and Europe, which caused a large number of deaths and paralysis of some social activities.
In 1741, the United Kingdom 27,000 soldiers attacked Colombia, because 20000 people infected with yellow fever and collapse; 1762 British colonial army invaded Cuba, 15,000 soldiers in 8000 people died of yellow fever;
In 1793, the United States Philadelphia yellow fever pandemic, the city's 1/5 population died of yellow fever, leading to the community compley disintegrated. Followed by the epidemic along the Mississippi River deep to the North American center, the United States at least 50 million people suffering from the disease;
1800 years, the occurrence of yellow fever in Spain, killing at least 60,000 people;
In 1851, the Brazilian capital Rio de Janeiro due to yellow fever at least 23,000 people died;
Panama Canal digging the first phase of the project because of the serious epidemic and forced the project to stop;
1826 British colonial invasion of Africa when the disease, 535 colonial troops died in two months 115;
Before 1940, yellow fever in Africa is also the size of the popular continue to cause a large number of deaths.
In 1959, Zaire and Sudan have been outbreaks. 1960 ~ 1962 Ethiopia serious pandemic, 1 million people about 10% of the population infected with the disease, of which 30,000 people died.
Since the 1960s, the outbreak of yellow fever in Africa and South America has not been interrupted. The number of cases reported annually to the World Health Organization varies from nearly one hundred to several thousand cases.
Between 1987 and 1991, yellow fever was prevalent in Nigeria and hundreds of thousands were infected.
On November 1, 2012, 47 people in northern Darfur and Southern Darfur were infected with yellow fever and more than 92 cases of Sudanese yellow fever. Yellow fever to November 5, 2012, Sudan in Darfur, yellow fever epidemic, suspected cases reached 194 cases, including 67 cases of death, the mortality rate was 34.5%. Yellow fever
Disease yellow fever pathology / yellow fever yellow fever
Etiology
The pathogen is yellow fever virus, genus Flavivirus of the family Flaviviridae (the last group of parasitic viruses) has a cross-immune response with the same dengue virus. Virus particles were spherical, diameter 37 ~ 50nm, outside the lipoprotein capsule, capsule surface spikes. The viral genome is a single stranded stranded RNA with a molecular weight of about 3.8 x 106 and a length of about 11 kb, containing only a long open reading frame, about 96% of the nucleotides within this framework. The flavivirus genome is divided into two sections: the 5 'end 1/4 encodes the three structural proteins of the virus, namely protein C (capsid protein), M protein (membrane protein) and E protein (envelope protein) Terminal 3/4 encodes 7 nonstructural proteins. The 5 'and 3' ends of the genome have a noncoding region.
E protein is the main envelope glycoprotein, yellow fever virus hemagglutinin and neutralizing antigenic determinants, may be the ligand of some host cell surface receptors, when it binds to the receptor, can produce infection to cells. E protein may be a membrane fusion protein that can induce the envelope of the viral particles to fuse with the cell membrane, causing the virus particles to enter the cell and cause infection. M protein can cause increased infectivity of the virus and form the surface structure of the virus particles. The role of nonstructural proteins is not yet clear and may play an important role in the viral immune response.
Yellow fever virus has the characteristics of indeccupal such as liver, kidney, heart (human and primate) and neurotropic (mouse). After repeated passage of chicken embryos can be obtained as a virulence of the vaccine attenuated strain. Easy to be hot, commonly used disinfectant, yellow fever, sodium deoxycholate and other rapid inactivation, in 50% glycerol solution can survive for several months, in the case of freeze can remain viable for many years. Mice and rhesus are commonly used susceptible experimental animals.
