ROSGreen过氧.*化氢荧光探针 细胞生物学

ROSGreen^TM H₂O₂ Probe 过氧化.*氢荧光探针

搜索关键词：

Hydrogen Peroxide 过氧化氢；H₂DCFDA (DCFH-DA, DCFH)；BES-H2O2-Ac；APF 氨基苯基荧光素; Mitosox Red;

同义名：

ROSGreen^TM Hydrogen peroxide Probe；ROSGreen^TM Hydrogen peroxide sensor；ROSGreen^TM H₂O₂ sensor；

产品信息

背景需求

过氧化氢（Hydrogen peroxide, H₂O₂）是一种反映氧代谢副产物，用于许多氧化应激相关态的关键调节剂，参与人体大量的生理和病理活动，比如哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、神经性衰退疾病和唐氏综合征等，但目前对H₂O₂生成、积累、运输和功能的分子机制仍了解很少，zui大的限制在于缺乏灵敏且特异性H₂O₂探针，用于活细胞研究。目前能得到的H₂O₂反应性探针的缺陷包括1）来自其他ROS比如过氧亚硝基阴离子（ONOO^-）、过氧化基（ROO•）、超氧化物（•O₂^–）的背景荧光干扰；2）对外源活化酶的需求；3）水缺乏水溶性或不兼容于水溶体系；4）以及紫外区域的激发光谱特征等。

产品描述

本ROSGreen^TM H₂O₂ Probe正是克服以上缺陷开发的一款过氧化氢（H₂O₂）选择性探针。探针本身无荧光，可见光区域内无吸收峰。一旦接触H₂O₂，瞬间激发荧光增加并伴随可见波长吸收带的生成（Ex/Em= 490/514nm）。因其二元的吸收/发射荧光反应，此探针具有较大的动力学范围。与相似的ROS比如O₂^–，NO，或OCl^-相比，ROSGreen^TM H₂O₂ Probe对H₂O₂呈现出＞100倍（100-fold）的选择性。

注意事项

1）   本品的DMSO储存液需分装成单次用量后，-20ºC避光保存，避免反复冻融。所有工作液现配现用。

2）   整个操作过程中注意避光。

3）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【详见懋康内容】

1、   储存液制备

将低温保存的产品从冰箱取出，置于室温回温至少20min。低速离心3-5min。之后往瓶内加入适量无水DMSO充分溶解配成2~5mM储存液（比如，1mg ROSGreen^TM H₂O₂ Probe（Mw: ~ 600）加入333μl DMSO，充分溶解混匀后即得到5mM储存液）。按照单次用量分装冻存，避免反复冻融，至少3个月稳定。

2、   工作液准备

正式实验前，或取粉末按照【储存液制备】用DMSO溶解，或于室温融化一管DMSO储存液。

2.1 对于溶液H₂O₂测定，按照2~20μM工作液浓度制备2×工作液，用20mM Hepes缓冲液或其他缓冲液（pH 7.0）稀释储存液。工作液现配现用。建议使用5μM终浓度的ROSGreen^TM H₂O₂ Probe，测定溶液体系中H₂O₂浓度。

2.2 对于细胞H₂O₂测定，按照2~20μM工作液浓度制备1×工作液，用含20mM Hepes缓冲液的HBSS，pH 7.0 或PBS稀释储存液。工作液现配现用。

3、   上清液H₂O₂测定

4、   活细胞H₂O₂测定

染色示例

图1. Costar 黑色96孔培养板内CHO-K1活细胞用ROSGreen^TM H₂O₂ Probe的染色图。图A：对照细胞；图B：用H₂O₂（100μM）处理5min后的细胞；

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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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ROSGreen过氧.*化氢荧光探针 细胞生物学

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