乙型肝炎（HBV）核酸提取试剂盒50次/盒-核酸提取试剂盒-上海抚生实业有限公司

货号	FS-02R9524

产品属性:

产品名称：乙型肝炎（HBV）核酸提取试剂盒 50次/盒
货号：FS-02R9524

规格：50次/盒

分类：纯化试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光，快递免费送货上门。

QQ截图20200511164444.jpg

试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、样品稀释液：1×20ml。

4、检测稀释液A：1×10ml。

5、检测稀释液B：1×10ml。

实验过程：

一、试剂准备

1. DNA模板

2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步骤

1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer 5μl

dNTP mixl 4μl

引物1（10pM） 2μl

引物2（10PM） 2μl

Taq酶（2U/μl） 1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至 50 μl

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。

3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

特点优势：

1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。

2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。

3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

5. 优势1：序列资源丰富，除公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。

6. 优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

钨钠 CP,99.0%钨粉 9.95%,<1.1μm儿茶酚氧位甲基转移检测试剂盒

4-甲氧基 99%碳化钛 99%,2-4μm血红加氧检测试剂盒

酪 98%碳化钛 99%,40nm水稻呼肠弧病检测试剂盒

盐酪 98%碳化钛 99.99% metals basis水稻矮缩病检测试剂盒

2-乙酰基吡 99%氮化钛 99%，20nm水稻黄斑驳病检测试剂盒

2-乙酰基吡 ≥99%,FG,FCC氮化钛 99.5%,2-10 μm酮脱氢磷检测试剂盒

乙对甲氧基苄酯 98%铽粉 99.9% metals basis酮脱氢激检测试剂盒

乙对甲氧基苄酯 97%,FCC一氧化钛 99.9% metals basis，粉末，100-200 mesh阿拉伯半乳糖蛋白检测试剂盒

3-乙酰氧基-2-丁酮 98%一氧化钛 99.9%，颗粒：1-5mm1-氨基环烷羧检测试剂盒

4-乙酰氧基-2, 5-二甲基 -3-呋喃酮 98%碳化钽 99.9%Bt-Cry1Ie蛋白检测试剂盒

黑胡椒油食品级碳化钽 99.5%,≤3 μmCDDK关联蛋白家族检测试剂盒

布枯油 natural, FG碳氮化钛 powder, 1-2 μm, 99%钙调依赖蛋白激检测试剂盒

桂油 FCC碳化钨粉末，99.9% metals basis, <10μm钙和钙调依赖蛋白激家族检测试剂盒

小豆蔻油 FCC碳化钨 9.8%，3-20nm 凝脂检测试剂盒

L-香芹 97%碳化钨粉末，99.9% metals basis, ≤1μm果胶甲基酯检测试剂盒
乙型肝炎（HBV）核酸提取试剂盒 50次/盒 芴甲氧羰基-L-天冬-1-叔丁酯 98%移动白板架 240*120加厚型单面磁性白板配加厚型双杠Anti-ProADM (Adrenomedullin)-N20 peptide /FITC 荧光标记肾上腺髓质前提N端20肽抗体IgG

L-精对硝基酰 98%(+)-樟脑 99%Anti-pro-caspase3/FITC 荧光标记半胱天冬-3原抗体IgG

L-异酯盐盐 99%双(4-)磷酯 99%Anti-Profilin 1/FITC 荧光标记前纤维蛋白1抗体IgG

D-叔丁酯盐盐 99%1，2，4-三氮唑-3-羧甲酯 99%Anti-Profilin 2/FITC 荧光标记前纤维蛋白2抗体IgG

L-天冬酰叔丁酯 95%2,2-双(羟甲基) 98%Anti-PROK1/EG-VEGF/FITC 荧光标记腺衍生血管内皮生长因子抗体IgG

2-(7-氮杂并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟盐 98%2,2-二羟甲基丁 98%Anti-Proteasome 20S LMP2 /FITC 荧光标记兔抗、大、小鼠低分子质量蛋白2抗体IgG

N-CBZ-D- 96%乙酰氧基乙酰氯 97%Anti-Proteasome 20S LMP7 /FITC 荧光标记低分子质量蛋白7抗体IgG

N-苄氧羰基-L- N-羟基琥珀酰亚酯98%3,5-二羟基甲 97%Anti-Melamine/HRP 辣根过氧化物标记抗三聚抗体IgG

使用方法:

一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。

1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。

3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。

6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。

二、样品 DNA 的制备

7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。

三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。