【苯甲脒-琼脂糖凝胶 4FF】参数说明_化学性质_操作步骤

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【苯甲脒-琼脂糖凝胶 4FF参数说明】

中文名：苯甲脒-琼脂糖凝胶 4FF

英文名：Benzamidine Sepharose 4FF

供应商：上海远慕

基质：4%交联琼脂糖

形状：球形

粒径：45~165 μm

耐压：0.3MPa

耐热：120℃,pH7,水中20min

zui高流速：250cm/h

排阻极限：60000~20×106 (球蛋白)

【苯甲脒-琼脂糖凝胶 4FF】参数说明_化学性质_操作步骤

【苯甲脒-琼脂糖凝胶 4FF化学性质】

外观：本品为乳白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

保存：产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20% 乙醇)，通风、干燥、清洁的地方;不能冷冻，用过的柱子贮存在4℃(20% 乙醇)。

保质期：暂定5年。

应用：本产品为传统的琼脂糖介质，具有非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶色谱纯化。

用途：生化研究;巨大分子病毒、疫苗的分离。

化学稳定性：以下溶液中40℃下稳定;2mol/L NaOH;70%EtOH;30%异丙醇;30%乙腈;1%SDS;6mol/L盐酸胍;8mol/L尿素。

性状：含20%乙醇，底部为乳白色胶体。高度偶联的琼脂糖凝胶，大大加强了机械性能，快流速;经去电核处理，非特异性吸附极低，样品回收率高;*的化学稳定性，可用多种促溶剂、有机溶剂操作和1-2M NaOH在位清洗。

【苯甲脒-琼脂糖凝胶 4FF操作步骤】

1.装柱：

a、让所有的材料和试剂达到室温;配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。

b、根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。

c、将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

d、用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡;打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

e、打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定;用2~3柱体积的缓冲液平衡柱子。

2.平衡：

让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变;平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3.上样：

a、样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。

b、一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

c、介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度;盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。

4.洗脱：

疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱;加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱;zui常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

5.再生：

一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用;若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗(CIP)除去。

6.在位清洗：

a、对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2MNacl去除。

b、对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1MNaOH去除。

c、对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡;清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7.去热源：

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时;或用以下方法步骤去除：

a、2倍柱体积的70%乙醇;

b、2倍柱体积50mMTris-HclpH7.5;

c、1倍柱体积4M尿素;

d、3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1MNaCl;上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

8.消毒：

用0.5~1MNaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

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