【胰蛋白酶-琼脂糖凝胶 4B】参数说明_操作步骤_分离技巧

胰蛋白酶-琼脂糖凝胶 4B由上海远慕生物现货供应，本司供应的琼脂糖凝胶产品非常多，主要有：精氨酸-琼脂糖凝胶 4B ，羧基-琼脂糖凝胶 4B，苯甲脒-琼脂糖凝胶 4FF ，肝素-琼脂糖凝胶 H.P. ，谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 4B，蓝色-琼脂糖凝胶 CL-6B ，苯基-琼脂糖凝胶 6FF，丁基-琼脂糖凝胶 4FF ，更多系列请!

【胰蛋白酶-琼脂糖凝胶 4B参数说明】

中文名：胰蛋白酶-琼脂糖凝胶 4B

英文名：Trypsin Sepharose 4B

供应商：上海远慕

凝胶类型：疏水层析填料

粒径： 45-165μm

工作PH值：3-12

操作温度：4-40℃

结构成分：4%交联琼脂糖

包装：25毫升/瓶，100毫升/瓶

配基偶联量：40μmol phenyl/ml 凝胶

保存条件：4℃

性状：白色微球，凝胶状，保存在20%酒精溶液中

应用：疏水层析介质，适合含芳香族配体蛋白纯化，特别适合单抗的纯化等

【胰蛋白酶-琼脂糖凝胶 4B】参数说明_操作步骤_分离技巧

【胰蛋白酶-琼脂糖凝胶 4B操作步骤】

1、装柱

凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。

以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶(约为柱床体积的1.15倍)，清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液(按凝胶：缓冲液=3：1的比例)配成匀浆。不要剧烈搅动，以免搅坏微球。

将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜)，务必使底端无气泡。

用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

打开蠕动泵，让缓冲液缓慢流过，使柱床稳定。

用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

2、平衡

让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

3、上样

样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。

4、洗脱

用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

5、再生

一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

6、注意

在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。

【胰蛋白酶-琼脂糖凝胶 4B分离技巧】

1、 分离时流速不可太快，切切不可心急，所谓欲速则不达;接馏分时可开全速，节省时间。

2、柱子尽可能长，葡聚糖凝胶柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。

3、馏分一定要接的细，可1/10，或1/20 个保留体积接成一馏分。

4、 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。

5、鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质

6、葡聚糖凝胶对黄酮类成分的分离效果，方法很成型，有大量文献参考。

7、填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。暂时不用试可以水洗→含水醇洗(醇的浓度逐步递增)→醇洗，zui后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时，可在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙迷洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60～80°C干燥后保存。

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