【谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 H.P. 】参数说明_使用方法_注意事项

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【谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 H.P.参数说明】

中文名：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 H.P.

英文名：Glutathione Sepharose H.P.

供应商：上海远慕

规格：10ml、50ml

保存温度：4-8℃

操作温度：4-40℃

分离范围：70,000-40 ×106

凝胶类型：凝胶过滤填料,凝胶层析介质

应用：蛋白、大分子复合物、病毒、核酸、多糖的分离、分子量测定。

【谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 H.P. 】参数说明_使用方法_注意事项

【谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 H.P. 注意事项】

1、不同配基的偶联方法与上面类似，但是反应的条件例如：配基加入量，反应时间，反应温度应根据配基的不同进行适当的调整;

2、可用碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液做为偶联缓冲液，但不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的缓冲液。

3、产品应密封贮存在4℃~25℃(保存溶液为20%乙醇)，通风、干燥、清洁的地方。

4、不能冷冻。

5、用过的柱子贮存在4℃(20%乙醇)。

【谷胱甘肽-琼脂糖凝胶 H.P. 使用方法】

1、乙醇浸泡：在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

2、无盐水浸泡：室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的*溶胀，然后;

3、盐酸浸泡：在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性;

4、将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层;

5、上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

6、凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免;难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可;

7、洗脱方法：可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化;

8、在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白;方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

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