【温馨提示】细胞用途:只可用于科研,不可用于临床诊断和治疗。
产品名称 | 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-p7使用说明书 |
货期 | 3-5天 |
发货地 | 上海 |
细胞名称 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-p7使用说明书
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 CHO-HCV-P7细胞整合有丙型肝炎病毒的P7基因,能稳定表达P7蛋白,是HCV基础研究的*摸型。它由武汉大学病毒学国家重点实验室郭佳博士于2008年构建并保存。
培养条件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C19
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶 同工酶鉴定
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过zui易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合
操作步骤:
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片,待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室温孵育爬片20min,使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15min(一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢),PBS冲洗3次,每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min,PBS冲洗3次,每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育:按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗,滴加在爬片上,于4°C湿盒中孵育一夜,PBS冲洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:选与一抗对应的二抗,按比例稀释后滴加在爬片上,37°C湿盒中孵育30min,PBS冲洗3次,每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干,爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下观察,当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染:用Harris苏木素复染30s~1min,水洗后用1%的盐酸酒精分化,再用蒸馏水(或PBS)水洗返蓝。
10. 封片:将中性树胶滴在爬片一侧,再用盖玻片盖上,先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧,以免产生气泡,封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
人二羟基赖正己氨酸(DHLNL)免疫试剂盒 Hurman dihydroxylysinonorleucine,DHLNL ELISA kit
人二磷酸腺苷(ADP)免疫试剂盒 Human adenosine diphosphate,ADP ELISA kit
人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4(UGT2B4)免疫试剂盒 Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4,UGT2B4 ELISA Kit
人二胺氧化酶(DAO)免疫试剂盒 Human diamine oxidase,DAO ELISA Kit
人儿茶酚抑素免疫试剂盒 Human catestatin ELISA Kit
人儿茶酚胺(CA)免疫试剂盒 Human catecholamine,CA ELISA Kit
人鹅膏蕈碱免疫试剂盒 Human Amanitin ELISA Kit
人多药耐药相关蛋白(MRP)免疫试剂盒 Human multidrug resistance-associated protein,MRP ELISA Kit
人多效生长因(PTN)免疫试剂盒 Human pleiotrophin ELISA Kit果胶酶(+4℃) Pectinase 9032-75-1
过磷酸钙 Calcium phosphate monobasic 10031-30-8
过氧化氢异丙苯氧化液(*) Cumyl hydroperoxide 80-15-9
过氧化月桂酰;过氧化十二酰 Lauroyl peroxide;Dodecanoyl peroxide;Alperox C; 105-74-8
乳过氧化物酶(-20℃) Peroxidase 9003-99-0
过氧乙酸(A B) Peroxyacetic acid 79-21-0
过一硫酸氢钾复合盐 Potassium peroxymonosulfate 70693-62-8