【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
| 产品名称 | 小鼠纤维肉瘤细胞；WEHI-13VAR使用说明书 |
| 货期 | 3－5天 |
| 发货地 | 上海 |
细胞名称 小鼠纤维肉瘤细胞；WEHI-13VAR使用说明书
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁及悬浮生长
特征特性 在*存在下对TNF敏感
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 新生牛血清，10%
传代方法 1：4-1：6
传代情况
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
复苏操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
GM-CSFR alpha 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体α抗体
GSTP1 *硫转移酶pi基因抗体
Gab2 接头蛋白Gab 2抗体
Glucose 6 phosphatase alpha 葡萄糖6磷酸酶α/G6Pase-α抗体
GPI 糖磷脂酰肌醇抗体
GLO1 乙二醛酶1抗体
GABPB2 核呼吸因子2抗体
GDIA1 肿瘤转移抑制基因GDIA1抗体
D4 GDI 肿瘤转移抑制基因GDIA2抗体
Glucagon 胰高血糖素抗体
GPAM 线粒体甘油3磷酸酰基转移酶抗体
Glypican 6 磷脂酰基醇蛋白聚糖-6抗体GVPC Agar Plate
BCYE琼脂平板 10个/包 用于军团菌的分离培养
BCYE Agar Base
采样吸收液1-GVPC液体培养基 100g 用于空调系统军团菌采样时吸收液
GVPC Liquid Medium
采样吸取液1-GVPC液体培养基添加剂 1ml*3支/管 每套加入100ml采样吸取液1-GVPC液体培养基中
菌种保存和样品运输培养基
无菌病毒运输液（VTM） 3ml*36 用于甲流病毒标本运送
VTM Broth
Stuart* 250g 用于致病菌标本的运送保存
Stuart Transport Medium
MEM维持液 36支 用于手足口病样品液的运输
