小鼠杂交瘤细胞；c7b8F10培养

细胞名称  小鼠杂交瘤细胞；c7b8F10培养
形态特性   淋巴母细胞样
生长特性  半贴壁生长
特征特性   可产生单克隆抗体。 
培养条件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
传代方法   1:3传代,2-3天传一代
传代情况  
冻存条件   基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测  阴性
STR  
同工酶  
染色体  
使用权限  A类

 复苏操作要点： 
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过zui易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BIU-87(人膀胱癌细胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
 操作步骤：
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
【温馨提示】细胞用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)免疫试剂盒    Rabbit amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA Kit
兔S100-A5蛋白(S100A5)免疫试剂盒    Rabbit Protein S100-A5,S100A5 ELISA kit
兔P物质受体(SP-R)免疫试剂盒    Rabbit Substance-P receptor,SP-R ELISA kit
兔p物质(SP)免疫试剂盒    Rabbit Substance P,SP ELISA Kit
兔p53(p53)免疫试剂盒    Rabbit p53/tumor protein,p53/TP53 ELISA Kit
兔N端前脑钠素(NT-proBNP)免疫试剂盒    Rabbit N-terminal pro-brain natriuretic,NT-proBNP ELISA kit
兔NADPH氧化酶1()免疫试剂盒    Rabbit NADPH oxidase 1, ELISA kit
兔C肽(C-Peptide)免疫试剂盒    Rabbit C-Peptide ELISA kit
兔CD8分(CD8)免疫试剂盒    Rabbit Cluster of differentiation 8,CD8 ELISA Kit
兔CD4分(CD4)免疫试剂盒    Rabbit Cluster of differentiation 4,CD4 ELISA Kit
兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)免疫试剂盒    Rabbit Bcl-2 Assaciated X protein,BAX ELISA Kit
兔ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)免疫试剂盒    Rabbit ADAM DAB complete peroxidase substrate system    shēng huà shì jì    容量：    2～8℃    25克
D-2-氨基丁酸    shēng huà shì jì    容量：        100克
D-201高等级大孔强碱Ⅰ型阴离子交换树脂    shēng huà shì jì    容量：     保存-20℃    1克
D，E中和肉汤    shēng huà shì jì    容量：    RT    250克
D，E中和琼脂    shēng huà shì jì    容量：    RT    100克
D(-)樟脑磺酸    shēng huà shì jì    容量：        25克
 D-(-)水杨苷    shēng huà shì jì    容量：        100克
D(-)酒石酸钠    shēng huà shì jì    容量：        5克
Con A琼脂糖凝胶4B    shēng huà shì jì    容量：        500毫克
CO2结合力测试盒    shēng huà shì jì    容量：    RT    500克