兔血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在兔血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
00053 人白介素9(IL-9)ELISA试剂盒 Human Interleukin 9,IL-9 ELISA Kit 96T/48T
00054 人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒 Human Interleukin 8,IL-8 ELISA Kit 96T/48T
00055 人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 Human Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit 96T/48T
00056 人白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒 Human Interleukin 5,IL-5 ELISA Kit 96T/48T
00057 人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒 Human Interleukin 4,IL-4 ELISA Kit 96T/48T
00058 人白介素3(IL-3)ELISA试剂盒 Human Interleukin 3,IL-3 ELISA Kit 96T/48T
00059 人白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ )ELISA试剂盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit 96T/48T
00060 人白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA试剂盒 Human soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRα ELISA Kit 96T/48T
00061 人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit 96T/48T
00062 人白介素1α(IL-1α )ELISA试剂盒 Human Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit 96T/48T
00063 人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA Kit 96T/48T
00064 人白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA Kit 96T/48T
00065 人白介素16(IL-16)ELISA试剂盒 Human Interleukin 16,IL-16 ELISA Kit 96T/48T
00066 人白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 Human Interleukin 13,IL-13 ELISA Kit 96T/48T
00067 人白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒 Human Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA Kit 96T/48T
00068 人白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒 Human Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA Kit 96T/48T
00069 人白介素11(IL-11)ELISA试剂盒 Human Interleukin 11,IL-11 ELISA Kit 96T/48T
00070 人白介素10(IL-10)ELISA试剂盒 Human Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit 96T/48T
00071 人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors binding protein 4,IGFBP-4 ELISA Kit 96T/48T
00072 人胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors 2,IGF-2 ELISA Kit 96T/48T
00073 人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors 1,IGF-1 ELISA Kit 96T/48T
00074 人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒 Human Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit 96T/48T
00075 人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒 Human intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISA Kit 96T/48T
00076 人肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒 Human hepatocyte growth factor,HGF ELISA Kit 96T/48T
00077 人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒 Human neutrophil activating protein-2,NAP-2 ELISA Kit 96T/48T
00078 人趋化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA试剂盒 Human fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 96T/48T
00079 人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒 Human basic fibroblast growth factor 9,bFGF-9 ELISA Kit 96T/48T
00080 人E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 Human E-Selectin ELISA Kit 96T/48T
00081 人鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 Human eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA Kit 96T/48T
00082 人CD30分子(CD30)ELISA试剂盒 Human Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA Kit 96T/48T
00083 人白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒 Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule,ALCAM ELISA Kit 96T/48T
00084 人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒 Human Activin A,ACV-A ELISA Kit 96T/48T
00085 人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒 Human Atrial Natriuretic Peptide,ANP ELISA Kit 96T/48T
00086 人内*肽-2(EM-2)ELISA试剂盒 Human endomorphin-2,EM-2 ELISA Kit 96T/48T
00087 人α-内*肽(α-EP)ELISA试剂盒 Human α-Endomorphin,α-EP ELISA Kit 96T/48T
00088 人抑制素(INH)ELISA试剂盒 Human Inhibin,INH ELISA Kit 96T/48T
00089 人6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒 Human 6-hydroxydopamine,6-OHDA ELISA Kit 96T/48T
00090 人心纳素(ANF)ELISA试剂盒 Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA Kit 96T/48T
00091 人神经髓鞘蛋白(p2)ELISA试剂盒 Human myelin protein 2,p2 ELISA Kit 96T/48T
00092 人神经激肽B(NKB)ELISA试剂盒 兔血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒 Human Neurokinins B,NKB ELISA Kit 96T/48T
00093 人强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒 Human dynorphin,Dyn ELISA Kit 96T/48T
00094 人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒 Human enkephalin,ENK ELISA Kit 96T/48T
00095 人神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒 Human neuropeptide Y,NP-Y ELISA Kit 96T/48T
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5兔血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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