土壤碱性蛋白酶试剂盒-微量法注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格：100T/48S
产品内容：
试剂一：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用； 试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10mL 蒸馏水充分溶解待用；
试剂四：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：液体5mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体1mL×1 支，0.25 μmol/mL 酪氨suan溶液，4℃保存。
土壤碱性蛋白酶试剂盒-微量法产品说明：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤碱性蛋白酶在碱性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。碱性条件下，土壤碱性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨suan；在碱性条件下，酪氨suan还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm 有特征吸收峰。
实验中所需仪器及设备：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量比色皿/96孔板、蒸馏水、50目筛（或更小）。
样品处理：
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。
土壤碱性蛋白酶试剂盒-微量法操作步驟：
1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。
2、样本测定：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
风干土样（g） | 0.05 | 0.05 | - | - |
试剂一（μL） | 50 | 50 | - | - |
试剂二（μL） | 100 | - | - | |
混匀后，37℃反应24h，期间振荡5-6 次，使土样与反应液充分接触。 | - | - | ||
试剂三（μL） | 100 | 100 | - | - |
试剂二（μL） | - | 100 | - | - |
混匀，10000rpm 室温离心10min，取上清液 | - | - | ||
上清液（μL） | 44 | 44 | - | - |
标准液（μL） | - | - | 44 | - |
蒸馏水（μL） | - | - | - | 44 |
试剂四（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
试剂五（μL） | 26 | 26 | 26 | 26 |
混匀，40℃水浴 10min，10000rpm 室温离心 10min，取上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A，分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 | ||||
注意：标准管、空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
土壤碱性蛋白酶试剂盒-微量法活性计算：
单位定义：每天每g土样中产生1μmol 酪氨suan为一个土壤碱性蛋白酶活力单位。
土壤碱性蛋白酶(U/g)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V 反总÷W÷T= 0.0625×ΔA测定÷ΔA标准÷W。C 标准管：标准管浓度，0.25 μmol/mL；V 反总：酶促反应总体积，0.25mL；T：反应时间，
1d；W：样本质量，g。
注意事项：
1、当吸光值大于1.5时，建议将上清液稀释后进行测定，计算时注意乘以稀释倍数。
