土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)测试盒-微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
规格：100T/96S
产品内容：
试剂一：液体 42mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 100mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 576µL 无水乙醇（自备），24 µL 蒸馏水充分溶解。
（变褐色后不能再使用）
标准品：液体 1mL×1 支，0.5 µmol/mL 苯fen标准液，4℃保存。
土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)测试盒-微量法产品说明：
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响，根据最适 pH 范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
碱性环境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二钠水解生成苯fen和磷酸氢2钠，通过测定酚的生成量即可计算出 S-AKP/ALP 活性。
试验中所需的仪器和试剂：
分光光度计/酶标仪、微量比色皿/96 孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。
操作步骤：
土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)测试盒-微量法一、粗酶液提取：
称取风干混匀土壤约 0.1g，加入 0.05mL 甲苯（自备），轻摇 15min；加 0.4 mL 试剂一并且摇匀后，置于 37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心 10min，取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤：
（1）分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。
（2）空白管：取微量比色皿/酶标板，加入 10 µL 试剂一，20 µL 试剂三，4 µL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166µL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 空白管。
（3）标准管：取微量比色皿/酶标板，加入 10 µL 标准液，20 µL 试剂三，4 µL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166µL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 标准管。
（4）测定管：取微量比色皿/酶标板，加入 10 µL 上清液，20 µL 试剂三，4 µL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 166µL，混匀后室温静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)测试盒-微量法注意：空白管和标准管只需要测定一次。
S-AKP/ALP 活性计算：
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。
S-AKP/ALP（ nmol/d/g ）=[C 标准液×(A 测定管－ A 空白管)÷(A 标准管－ A 空白管)]×V 总
÷W÷T×1000
=725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W
C 标准液：0.5 µmol/mL； V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24 h=1 d；1000：单位换算系数，1µmol=1000nmol。
注：线性范围为 0.03125µmol/mL-2.5µmol/mL
