测定意义:
淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。
测定原理:
淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与 3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在 508nm 处有特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。
土壤淀粉酶(S-AL)检测试剂盒自备实验用品及仪器:
天平、水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体 8mL×1 瓶,4℃保存。试剂二:液体 3mL×1 瓶,4℃保存。试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
测定操作表:
| 对照管 | 测定管 |
土样(g) | 0.02 | 0.02 |
甲苯(μ L) | 10 | 10 |
25℃静置 15min | ||
试剂一(μ L) | 110 | 50 |
试剂二(μ L) |
| 60 |
充分混匀,37℃震荡 1h,8000rpm,25℃,离心 10min | ||
上清液(μ L) | 100 | 100 |
试剂三(μ L) | 100 | 100 |
充分混匀,90℃水浴 5min,待冷却后,于微量石英比色皿/96 孔板中测定 508nm 吸光值,分别记为 A 对照管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 对照管。 | ||
土壤淀粉酶(S-AL)检测试剂盒计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.2525x - 0.034,R² = 0.9917
酶活单位定义:每g 土样每天催化生成 1mg 还原糖为一个酶活力单位。S-AL(mg/d /g 鲜重)=(△A +0.034)÷ 0.2525×V 反总÷W÷T
= 10.464×(△A +0.034)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1/24d;W:样本质量,g。b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1263x - 0.034,R² = 0.9917
酶活单位定义:每g 土样每天催化生成 1mg 还原糖为一个酶活力单位。S-AL(mg/d/g)=(△A +0.034)÷ 0.1263×V 反总÷W÷T
=20.928×(△A +0.034)÷W
土壤淀粉酶(S-AL)检测试剂盒V 反总:反应体系总体积,0.11mL;T:反应时间,1/24d; W:样本质量,g。















