土壤碱性蛋白酶（S-ALPT）检测试剂盒说明书，正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化， 其水解产物是高等植物的氮源之一。S-ALPT 在碱性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：
碱性条件下，S-ALPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在 680nm 有特征吸收峰。
土壤碱性蛋白酶（S-ALPT）检测试剂盒自备实验用品及仪器：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、双蒸水
试剂组成和配置：
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 5ml 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂 4℃保存； 试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 50μ L 试剂七使粉剂润湿，然后加入 10ml 试
剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂 4℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 20ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存；
试剂五：液体 3mL×1 瓶，4℃保存；
试剂六：液体 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液，4℃保存； 试剂七：液体 1.5mL×1 支，4℃保存；
样品处理：
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。
测定操作：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。
2、试剂二、三和四 40℃水浴 10min。
3、样本测定：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样（g） | 0.01 | 0.01 |
试剂一（μ L） | 50 | 150 |
试剂三（μ L） | 100 |
|
土壤碱性蛋白酶（S-ALPT）检测试剂盒混匀后，40℃水浴 30min，振荡 5-6 次，使土样与反应液充分接触
试剂二（μ L） | 50 | 50 |
混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液，在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂
| 测定管 | 对照管 | 标准管 |
上清液（μ L） | 30 | 30 |
|
试剂六（μ L） |
|
| 30 |
试剂四（μ L） | 140 | 140 | 140 |
试剂五（μ L） | 30 | 30 | 30 |
混匀，40℃水浴 20min，680nm 下读取各管吸光值A
注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
S-ALPT 活性计算：
单位定义：每天每g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-ALPT 活力单位。
S-ALPT(mg/d/g)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=48×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管
土壤碱性蛋白酶（S-ALPT）检测试剂盒C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.2mL；T：反应时间，30min=1/48d； W：样本质量，0.01g。
