土壤脲酶（UE）检测试剂盒-可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
产品内容：
提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存，临用前加6mL蒸馏水充分溶解；
试剂二：液体25mL×1瓶，4℃避光保存；
试剂三 A 液：液体 1mL×1 支，4℃保存；
试剂三 B 液：液体 4mL×1 瓶，4℃保存；临用前将 A 液倒入 B 液中混合，待用； 试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮标准液。
产品说明：
脲酶（UE）广泛分布于植物的种子中，也存在于动物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲
酶。UE能够水解尿素产生氨和碳酸，对尿素转化起关键作用。利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N来反应UE活性。
土壤脲酶（UE）检测试剂盒-可见分光光度法自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、天平、研钵/匀浆器、低温离心机、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。操作步骤：
一、样品处理
1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g 离心15min，取上清待测。
2.细胞/细菌：按照细胞/细菌数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1 的比例（建议500 万个细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率300w，超声3 s，间隔7 s，总时间3min）； 然后4℃，12000g 离心15min，取上清置于冰上待测。
3.血清（浆）或其它液体：直接检测。
二、测定操作：
1、可见分光光度计预热 30min，波长调至 630nm，蒸馏水调零。
2、将 1mg/mL 氮标准液用蒸馏水稀释至 2µg/mL 备用。
3、加样表：
试剂名称（µL） | 空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 |
样品 | - | - | 100 | 100 |
蒸馏水 | - | - | - | 200 |
试剂一 | - | - | 200 | - |
试剂二 | - | - | 400 | 400 |
充分混匀，于 37℃反应 1h， | ||||
反应混合液 | - | - | 400 | 400 |
蒸馏水 | 400 | - | - | - |
标准液 | - | 400 | - | - |
试剂三 | 80 | 80 | 80 | 80 |
试剂四 | 60 | 60 | 60 | 60 |
混匀，室温静止 20min。 | ||||
蒸馏水 | 460 | 460 | 460 | 460 |
充分混匀后测定 630nm 处吸光值，记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管和 A 对照管。计 算∆A 标准=A 标准管-A 空白管，∆A 测定=A 测定管-A 对照管。 | ||||
三、计算公式：
1、液体中UE活力的计算：
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟产生1µg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE（U/mL）=∆A测定÷∆A标准×C标准品×V酶促÷V样÷T
=0.233×∆A测定÷∆A标准。2、组织、细菌或细胞中UE活力的计算：
1. 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1µg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE活力（U/mg prot）=∆A测定÷∆A标准×C标准品×V酶促÷(V样×Cpr)÷T
=0.233×∆A测定÷∆A标准÷Cpr。
2. 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1µg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（U/g鲜重）=∆A测定÷∆A标准×C标准品×V酶促÷(W× V样÷V提取)÷T
=0.233×∆A测定÷∆A标准÷W。
3. 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1百万个细菌或细胞每分钟产生1µg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE活力（U /106 cell）=∆A测定÷∆A标准×C标准品×V酶促÷(细胞数量×V样÷V提取) ÷T
=0.233×∆A测定÷∆A标准÷细胞数量。
C标准液：标准液浓度，2 µg/mL；T：反应时间，60min；V酶促：酶促反应体系总体积，0.7mL； V样：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V提取：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；细胞数量：以百万计。土壤脲酶（UE）检测试剂盒-可见分光光度法
