细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）人脐静脉内皮细胞；HUV-EC-C培养准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
产品描述：
细胞名称 人脐静脉内皮细胞；HUV-EC-C培养
形态特性內皮细胞样
生长特性贴壁生长
特征特性该细胞可用于血管内皮修复损伤的研究。
培养条件F12K10%FBS
传代方法1:3传代,2-3天传一代
传代情况C17
冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测阴性
STRSTR鉴定
同工酶
染色体
注意事项：
1.一般客户拿到人脐静脉内皮细胞；HUV-EC-C培养后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
Aβ1-40*小鼠β淀粉样蛋白1-40规格48T/96T
βGAL*小鼠β半乳糖苷酶规格48T/96T
β-hexosaminidaseA*小鼠β氨基己糖苷酶A规格48T/96T
β2-GP1IgA/G/M*小鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M规格48T/96T
αHBDH*小鼠α羟基丁酸脱氢酶规格48T/96T
α-glucosidase*小鼠α葡萄糖苷酶规格48T/96T
α-GST*小鼠α谷胱甘肽S转移酶规格48T/96T
αManase*小鼠α甘露糖苷酶规格48T/96T
IFN-α*小鼠α干扰素规格48T/96T
Gal*小鼠α半乳糖基抗体规格48T/96T
人脐静脉内皮细胞；HUV-EC-C培养GAD-65(glutamatedecarboxylase)谷氨酸脱羧酶-65(C端多肽)0.5mgGAD-65(glutamatedecarboxylase
谷氨酸脱羧酶-67抗原GAD-67(glutamatedecarboxylase67)谷氨酸脱羧酶-67抗原0.5mgGAD-67(glutamatedecarboxylase67
生长抑制DNA损伤基因153抗原GADD153(GrowtharrestandDNAdamage-inducible153)生长抑制DNA损伤基因153抗原0.5mgGADD153(GrowtharrestandDNAdamage-inducible153
Galanin神经节肽Galanin神经节肽0.5mgGalanin神经节肽
galectin9半乳糖凝集素9（抗原）0.5mggalectin9半乳糖凝集素9（抗原
Galectin-3半乳糖凝集素-3(抗原)0.5mgGalectin-3半乳糖凝集素-3(抗原
Gamma-Synuclein/SNCG核突触蛋白-γ抗原Gamma-Synuclein/SNCG核突触蛋白-γ抗原0.5mgGamma-Synuclein/SNCG核突触蛋白-γ抗原
GAP-43(Growthassociatedprotein-43)生长相关蛋白-43（抗原）0.5mgGAP-43(Growthassociatedprotein-43
冷冻保存细胞之方法：
人脐静脉内皮细胞；HUV-EC-C培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
