冷冻保存细胞之方法:
人正常角膜上皮细胞;HNCEC/HL-008培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
产品描述:
细胞名称 人正常角膜上皮细胞;HNCEC/HL-008培养
形态特性上皮样
生长特性贴壁生长
特征特性该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
传代方法1:3传代,3-4天传1次
传代情况C5
冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测阴性
STR
同工酶
染色体
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)人正常角膜上皮细胞;HNCEC/HL-008培养准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项:
1.一般客户拿到人正常角膜上皮细胞;HNCEC/HL-008培养后,应该注意什么?
客户收到细胞先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
细胞出现问题,不予以重发的情况有哪些?
(1)客户造成细胞污染,不重发;
(2)客户不正确操作致细胞状态不好,不重发;
(3)非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好,不重发;
(4)细胞状态不好,未提供细胞培养前3天照片的,不重发;
(5)细胞培养时经其它处理的,不重发;
(6)细胞收到2天内,未告知,不重发;
(7)视具体情况而定。
BigET*小鼠大内皮素规格48T/96T
BigET*小鼠大内皮素规格48T/96T
PRL*小鼠催乳素规格48T/96T
GnRH*小鼠促性腺激素释放激素规格48T/96T
GHRH*小鼠促生长激素释放激素规格48T/96T
ACTH*小鼠促肾上腺皮质激素规格48T/96T
CRH*小鼠促肾上皮质激素释放激素规格48T/96T
FSH*小鼠促卵泡素规格48T/96T
TRH*小鼠促甲状腺素释放激素规格48T/96T
TSH*小鼠促甲状腺素规格48T/96T
人正常角膜上皮细胞;HNCEC/HL-008培养ER-alpha雌激素受体alphaER-alpha雌激素受体alpha0.5mgER-alpha雌激素受体alpha
ER-Alphapeptide雌激素受体(多肽抗原)0.5mgER-Alphapeptide雌激素受体(多肽抗原
ER-Alpha/BetaEstrpgenReceptorAlpha/Beta雌激素受体(抗原)0.5mgER-Alpha/BetaEstrpgenReceptorAlpha/Beta雌激素受体(抗原
ErbB-3/HER3(Epidermalgrowthfactorreceptor3)表皮生长因子受体3(抗原)0.5mgErbB-3/HER3(Epidermalgrowthfactorreceptor3
Erdj5/DNAJC10Erdj5/DNAJC10多肽Erdj5/DNAJC10Erdj5/DNAJC10多肽0.5mgErdj5/DNAJC10Erdj5/DNAJC10多肽
丝裂原活化蛋白激酶抗原ERK(Extracellularsignal-regulatedkinase)丝裂原活化蛋白激酶抗原0.5mgERK(Extracellularsignal-regulatedkinase
E-SelectinE选择素抗原E-SelectinE选择素抗原0.5mgE-SelectinE选择素抗原
Estradiol/BSA雌二醇偶联牛血清白蛋白Estradiol/BSA雌二醇偶联牛血清白蛋白1mgEstradiol/BSA雌二醇偶联牛血清白蛋白