大鼠卵泡膜细胞

大鼠卵泡膜细胞

细胞简介：大鼠卵泡膜细胞分离自卵巢组织；卵巢是雌性动物的生殖器官，卵巢的功能是产生卵以及类固醇激素。卵巢的位置与睾丸相同，仅左侧发育(右侧已退化)，呈葡萄状，均为处于不同发育时期的卵泡，卵泡呈黄色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小与年龄和产卵期有关。大多数脊椎动物有两个卵巢，但是部分鱼类的两个卵巢融合为单个结构，而所有鸟类只有左侧卵巢有机能。卵巢是位于子宫两侧的一对卵圆形的生殖器官，它的外表有一层上皮组织，其下方有薄层的结缔组织。卵巢的内部结构可分为皮质和髓质。皮质位于卵巢的周围部分，主要由卵泡和结缔组织构成；髓质位于中央，由疏松结缔组织构成，其中有许多血管、淋巴管和神经。哺乳动物的卵巢内卵泡的发育需要相关激素的调节才能完成，垂体促性腺激su(卵泡刺激素和黄体生成素)使原始卵泡开始发育，其过程中还产生大量的雌激素。雌激素是卵巢的颗粒细胞和卵泡膜细胞在垂体促性腺激su的作用下协同合成的，卵泡膜细胞合成的雄激素透过基膜进入颗粒细胞，并转变为雌激素。因此，卵泡膜细胞在生殖内分泌调节中占有关键的位置，了解其在病理及生理中的作用，对于与性激素有关的妇产科疾病(如多囊卵巢综合症、卵巢癌等)的研究有着重要意义。在哺乳动物卵泡生长发育的过程中，卵母细胞由不断增加的颗粒细胞层包裹。卵巢组织中的膜细胞作为卵泡的外层细胞可以维持卵泡结构的完整性，参与构成卵母细胞和颗粒细胞发育的微环境且为类固醇激素的生成提供底物。在哺乳动物中调节膜细胞类固醇激素生成的机制已见相关报道，但是有关卵泡膜细胞的聚集、生长和分化的研究尚不深入。

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

消化液：0.25%胰dan白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

传代比例：1:2

细胞基本属性：

原代细胞培养方法：

1.准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。

3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分钟。

4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。

5.消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6.分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。

7.计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。

8.培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶盖需拧松半圈。

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注意事项：

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。