大鼠支气管上皮细胞

细胞名称：大鼠支气管上皮细胞

组织来源：支气管组织

种属来源：大鼠

细胞简介：大鼠支气管上皮细胞分离自支气管组织；支气管(Bronchi)，是指由气管分出的各级分枝，由气管分出的一级支气管，即左、右主支气管。左主支气管与右主支气管相比较，前者较细长，走向倾斜；后者较粗短，走向较前者略直，所以经气管堕入的异物多进入右主支气管。支气管和气管还有以区别就是，气管是以“C”型的气管软骨为支架，而支气管不是。支气管上皮是气道与外界环境接触的第一道防线，不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞，还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子，从而参与气道炎症及免疫反应。支气管上皮细胞在哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、肺囊性纤维化以及一些感染性呼吸道疾病的发病机制中均起着重要的作用。体外培养的原代支气管上皮细胞因与体内组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性，因此，在基础及临床研究中极为重要。

培养基：含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

包被条件：鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%胰dan白酶

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%
一、细胞基本属性

二、使用方法：

大鼠支气管上皮细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈上皮细胞样，在技术部标准操作流程下，细胞可传可传1-2代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。

3. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

细胞培养注意事项：

公司产品仅用于科研关于原代细胞培养的注意事项。原代细胞培养是一项非常重要的实验技术，掌握好这些注意事项，能让你的实验更顺利。

首先，无菌操作是关键。一定要保持操作环境的清洁，避免细菌或霉菌污染，否则实验就会失败。

其次，选择适合的培养基和血清也很重要。不同细胞对培养基和血清的需求不同，所以要根据细胞类型来选择合适的培养基和血清。

另外，也是细胞培养中的成分。要新鲜配制，在贮存过程中也要定期补充。

在细胞培养过程中，静置培养也是非常重要的。细胞在消化分离后需要一定的时间来适应新环境，所以在这段时间内要避免频繁取出培养瓶观察。

此外，消化时间也要控制得当。通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可，过长的消化时间会导致细胞损伤加重，影响细胞培养成活率。

最后，对于一些特殊类型的细胞，可能需要添加一些特殊的生长因子来促进细胞生长和增殖。但需要注意的是，这些生长因子的费用通常较高。

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