一、细胞基本属性
产品名称 | 产品规格 | 商品货号 |
人副神经节瘤细胞永生化 | 1×106 | A01X1197 |
细胞详述
人副神经节瘤是一种神经内分泌肿瘤，来源于由神经嵴外胚层发育而成的副神经节细胞，属于良性肿瘤。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。
注意事项： 收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。
细胞特性
1) 组织来源于术后人的副神经节瘤组织。
2) 细胞鉴定：S100免疫荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5) 细胞生长方式：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。
二、使用方法：
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。
5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
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细胞培养注意事项：
公司产品仅用于科研关于原代细胞培养的注意事项。原代细胞培养是一项非常重要的实验技术，掌握好这些注意事项，能让你的实验更顺利。
首先，无菌操作是关键。一定要保持操作环境的清洁，避免细菌或霉菌污染，否则实验就会失败。
其次，选择适合的培养基和血清也很重要。不同细胞对培养基和血清的需求不同，所以要根据细胞类型来选择合适的培养基和血清。
另外，也是细胞培养中的成分。要新鲜配制，在贮存过程中也要定期补充。
在细胞培养过程中，静置培养也是非常重要的。细胞在消化分离后需要一定的时间来适应新环境，所以在这段时间内要避免频繁取出培养瓶观察。
此外，消化时间也要控制得当。通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可，过长的消化时间会导致细胞损伤加重，影响细胞培养成活率。
最后，对于一些特殊类型的细胞，可能需要添加一些特殊的生长因子来促进细胞生长和增殖。但需要注意的是，这些生长因子的费用通常较高。
