人支气管平滑肌细胞永生化

一、细胞基本属性

细胞详述

平滑肌即无纹肌的通称，平滑肌是由长纺锤形的单核细胞构成。它不构成独立的器官，而只是成为构成体壁和内脏壁的因素（肌层）。平滑肌细胞互相连接，形成管状结构或中空器官；在功能上可以通过缩短和产生张力使器官发生运动和变形，也可产生连续收缩或紧张性收缩，使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。

支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关，如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘发病时，可以检测到气管平滑肌发生数目的增生和肥大，表型也发生改变，由收缩型转为合成型与分泌型，并分泌多种与细胞因子；而且出现向气管腔迁移的迹象。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。

注意事项：  收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。

细胞特性

1)  细胞来源于人正常支气管组织。

2) 细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5） 细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

二、使用方法：

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基。

3. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml培养基重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的培养基(37℃预热)。

5)原瓶内贴壁细胞按正常消化处理。

4. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

细胞培养注意事项：

公司产品仅用于科研关于原代细胞培养的注意事项。原代细胞培养是一项非常重要的实验技术，掌握好这些注意事项，能让你的实验更顺利。

首先，无菌操作是关键。一定要保持操作环境的清洁，避免细菌或霉菌污染，否则实验就会失败。

其次，选择适合的培养基和血清也很重要。不同细胞对培养基和血清的需求不同，所以要根据细胞类型来选择合适的培养基和血清。

另外，也是细胞培养中的成分。要新鲜配制，在贮存过程中也要定期补充。

在细胞培养过程中，静置培养也是非常重要的。细胞在消化分离后需要一定的时间来适应新环境，所以在这段时间内要避免频繁取出培养瓶观察。

此外，消化时间也要控制得当。通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可，过长的消化时间会导致细胞损伤加重，影响细胞培养成活率。

最后，对于一些特殊类型的细胞，可能需要添加一些特殊的生长因子来促进细胞生长和增殖。但需要注意的是，这些生长因子的费用通常较高。

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