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PCR反应液的污染消除方法

时间:2023/9/8阅读:150
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对于PCR反应液的污染,可采取以下方法消除:

1. DNase I 法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30min后加热灭活,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。

2. 内切酶法:选择识别4个碱基的内切酶(如MspI和TaqI等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h后加热灭活进行PCR。

3. 紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射,注意事项与方法同上述UV照射法。

4. 尿mi 啶糖苷酶(UNG)法:用dUTP代替dTTP,使PCR产物中掺入大量dU。在再次进行PCR扩增前,用UNG处理PCR混合液即可消除PCR产物的残留污染。由于UNG在PCR循环中的变性一步便可被灭活,因此不会影响含dU的新的PCR产物。


总之,灵敏度越高的PCR反应越容易出现PCR污染。采用适当的措施消除污染,可以避免重复实验和浪费试剂,也使得实验结果更加可靠而精准。





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